Maklumat

Bagaimana cara membius nyamuk semasa kajian lapangan perangkap besar-besaran?

Bagaimana cara membius nyamuk semasa kajian lapangan perangkap besar-besaran?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Adakah sesiapa di antara anda mempunyai pengalaman dalam membius nyamuk semasa kajian lapangan perangkap besar-besaran?

Biasanya, perangkap nyamuk mempunyai jaring kecil untuk menangkap nyamuk. Jaring boleh, selepas dikumpulkan, diletakkan di dalam peti sejuk untuk membunuh nyamuk. Walau bagaimanapun, perangkap yang digunakan untuk kajian saya tidak mempunyai pukat, jadi nyamuk akan berterbangan di dalam perangkap.

Saya terfikir untuk menggunakan Ethyl Acetate untuk menghapuskan nyamuk, namun perangkap perlu kekal bersih daripada bau, jadi itu bukan pilihan. Saya fikir menggunakan CO2 adalah yang paling mudah, tetapi saya tidak akan dapat menyeret silinder CO2 yang besar ke semua lokasi perangkap saya.

Adakah mungkin menggunakan tablet CO2 yang boleh larut dalam air? Saya kemudian boleh menggunakan botol plastik di mana penutupnya disambungkan ke tiub, yang boleh saya letakkan di dalam perangkap. Adakah ini cekap? Apa pendapat kamu?

Terima kasih banyak-banyak!


Pembangunan dan Penilaian Lapangan Terhadap Gewang Nyamuk Sintetik Yang Lebih Menarik Dari Manusia

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania, Pusat Pengajian Sains Biologi, Universiti Nairobi, Nairobi, Kenya, Unit Kawalan Penyakit dan Biologi Vektor, London School of Hygiene and Tropical Medicine, London, United Kingdom

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania, Pusat Pengajian Sains Biologi, Universiti Durham, Durham, United Kingdom, Kumpulan Vektor, Sekolah Perubatan Tropika Liverpool, Liverpool, United Kingdom

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania, Unit Kawalan Penyakit dan Biologi Vektor, London School of Hygiene and Tropical Medicine, London, United Kingdom

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania

Makmal Gabungan Entomologi, Universiti Wageningen dan Pusat Penyelidikan, Wageningen, Belanda

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania

Kolej Gabungan Pertanian dan Sains Hayat, Universiti Cornell, Ithaca, New York, Amerika Syarikat

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania

Makmal Gabungan Entomologi, Universiti Wageningen dan Pusat Penyelidikan, Wageningen, Belanda

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania

Sekolah Gabungan Sains Biologi, Universiti Nairobi, Nairobi, Kenya

Gabungan Kumpulan Tematik Bioperubatan dan Sains Alam Sekitar, Institut Kesihatan Ifakara, Ifakara, Tanzania, Unit Kawalan Penyakit dan Biologi Vektor, London School of Hygiene and Tropical Medicine, London, United Kingdom, School of Biological Sciences, Durham University, Durham, United Kingdom


Latar belakang

Penyakit bawaan nyamuk terus membebankan masyarakat manusia dan menghalang kebajikan dan pembangunan ekonomi [1]. Walaupun menjanjikan penurunan insiden malaria dalam tempoh 15 tahun yang lalu [2], penyakit bawaan nyamuk lain seperti Zika, denggi, chikungunya dan virus West-Nile semakin meningkat dan telah merebak ke pelbagai benua [3, 4]. Sebagai tambahan kepada perubahan iklim, perdagangan antarabangsa dan pengangkutan manusia dianggap sebagai pemacu utama pengenalan vektor baharu, dengan atau tanpa patogennya, ke kawasan geografi yang berbeza [5,6,7,8,9].

Penurunan global malaria yang dilaporkan baru-baru ini dicapai terutamanya melalui penggunaan meluas jaring terawat insektisida (LLINs), penyemburan sisa dalam ruangan (IRS) dan rawatan dadah yang betul, tetapi rintangan racun serangga dan rintangan kepada ubat antimalaria mengancam untuk mencegah lebih lanjut. pengurangan atau mungkin membawa kepada kebangkitan semula penyakit [10, 11]. Kaedah alternatif inovatif sedang dibangunkan, seperti penggunaan kulat entomopatogen [12], biolarvicides (Bacillus spp.) [13, 14], sistem tolak-tarik dan teknik perangkap jisim menggunakan perangkap berumpan bau [15, 16] dalam kombinasi dengan pembaikan rumah [17]. Diharapkan bahawa penggunaan gabungan alat ini, bersama-sama dengan LLIN, IRS dan rawatan ubat yang betul, boleh menyediakan strategi yang lebih mampan untuk kawalan penyakit bawaan vektor [18]. Baru-baru ini, Pertubuhan Kesihatan Sedunia melancarkan pendekatan strategik bernama Global Vector Control Response, yang bertujuan untuk langkah kawalan mampan yang disesuaikan secara tempatan untuk menyasarkan berbilang vektor [19, 20].

Kejayaan pelaksanaan alat kawalan vektor baharu bersama alat sedia ada mengikut pendekatan pengurusan vektor bersepadu memerlukan pemahaman terperinci tentang tingkah laku nyamuk. Sebagai contoh, kadar sentuhan nyamuk dengan kelambu yang dirawat dengan racun serangga adalah parameter penting dalam memahami keberkesanan teknologi ini [21, 22] keberkesanan perangkap nyamuk yang lebih tinggi memerlukan pengetahuan tentang tingkah laku kemasukan perangkap [23,24,25], dan strategi tolak-tarik boleh dibuat lebih berkesan jika tingkah laku mencari makan nyamuk di kawasan peri-domestik difahami dengan baik [26].

Teknik pengesanan yang inovatif telah membuka pelbagai kemungkinan baru untuk memeriksa tingkah laku serangga dalam kedua-dua makmal dan (separuh) medan [27,28,29]. Tumpuan tinjauan kami adalah pada pengesanan nyamuk di angkasa untuk menjelaskan aspek asas tingkah laku mereka dalam fasa berbeza dalam sejarah hidup mereka. Gambaran keseluruhan alat yang digunakan untuk mengesan tingkah laku nyamuk dan kerumitan teknikalnya disediakan. Kami membincangkan bagaimana pengetahuan mendalam tentang tingkah laku nyamuk boleh dieksploitasi untuk pembangunan dan penilaian strategi kawalan vektor.


Buzzkill: menyasarkan sistem pendengaran nyamuk

Sistem pendengaran yang kompleks membolehkan nyamuk jantan terbang ke arah bunyi yang menyerupai nada terbang betina (phonotaxis).

Aspek lain tingkah laku akustik nyamuk seperti peranan persepsi bunyi pada wanita, masih tidak jelas.

Kajian pasangan lelaki-perempuan terpencil menyokong model komunikasi akustik nyamuk yang berbeza, yang menunggu ujian.

Interaksi akustik antara jantan dan betina yang spesifik dalam kawanan mengawan sebahagian besarnya masih belum diterokai.

Kerjasama yang dipertingkatkan dalam kalangan ahli fisiologi, ahli ekologi dan pakar kawalan akan diperlukan untuk mengeksploitasi biologi akustik untuk kawalan.

Bunyi memainkan peranan penting dalam ekologi deria nyamuk. Oleh itu persepsi akustik dan tingkah laku didorong oleh akustik mewakili sasaran kawalan yang berpotensi berkesan. Usaha saintifik terdahulu mengenai kawalan dan pengawasan berasaskan akustik tidak sistematik dan kekaburan di sekitar peranan tepat komunikasi akustik dalam interaksi khusus kekal. Di sini, kami menyemak secara ringkas kemajuan terkini dalam fisiologi pendengaran nyamuk dan ekologi tingkah laku serta aktiviti berterusan untuk memasukkan bunyi ke dalam alat kawalan dan pengawasan. Kami menyerlahkan bidang di mana peningkatan kerjasama antara ahli fisiologi, ahli biologi molekul, ahli ekologi tingkah laku dan pakar kawalan diperlukan untuk memanfaatkan kemajuan ini dan merealisasikan potensi teknologi dan strategi berasaskan bunyi.


Bahan dan Kaedah

Nyamuk

Ketegangan Mbita daripada An. gambiae sensu stricto koloni yang ditubuhkan sejak Januari 2001 telah diternak di bawah keadaan iklim ambien (iaitu suhu 23.2 ± 1.3°C dan 77.0 ± 2.6% kelembapan relatif (RH)) dan digunakan untuk bioassay separa medan. Semua eksperimen separa medan telah dijalankan di dalam rumah hijau berdinding skrin di Kampus Thomas Odhiambo Pusat Antarabangsa Fisiologi Serangga dan Ekologi (ais batu-TOC) (00°25'S, 34°13'E dan 1240 m dari aras laut) terletak di Perbandaran Mbita Point di barat Kenya. Nyamuk dewasa diberi makan darah tiga kali seminggu pada lengan manusia, dan dibekalkan dengan larutan glukosa 6% (w/v) pada kertas penapis. Telur diletakkan di atas kertas turas basah dan diletakkan di dalam dulang plastik (berukuran 35 cm × 25 cm × 5 cm) yang mengandungi air ditapis dari Tasik Victoria. Zarah-zarah bersaiz besar ditapis dengan menyalurkan air tasik ke atas arang kayu untuk meningkatkan pemakanan penapis An. gambiae larva nyamuk pada kira-kira 0.5 mg makanan bayi ikan Tetramin (Melle, Jerman) /larva yang disediakan tiga kali sehari. Pupa dikumpul setiap hari, diletakkan dalam cawan bersih (diameter 10 cm dan tinggi 14 cm) separuh diisi dengan air tasik yang ditapis dan kemudian dipindahkan ke dalam sangkar yang ditutup dengan jaringan (30 × 30 × 30 cm). Sebanyak 200 ekor nyamuk betina berumur 3-5 hari dan tanpa akses terlebih dahulu kepada makanan darah telah disedut secara rawak dari sangkar dan kelaparan selama 8 jam sebelum digunakan dalam eksperimen separa lapangan (20:00-06:30 h). Nyamuk hanya dibekalkan dengan air pada tuala kapas yang diletakkan di atas cawan pegangan nyamuk.

Penarik nyamuk

Penarik nyamuk sintetik 'Ifakara blend 1 (IB1)' [21], digabungkan dengan karbon dioksida yang dihasilkan oleh gula penapaian yis [22,23], telah digunakan dalam semua eksperimen. Kesemua sebelas sebatian konstituen IB1 kecuali karbon dioksida telah dibebaskan daripada LDPE (Audion Elektro, Weesp, The Netherlands) sachet atau jalur nilon (Bata Shoe Company, Kenya). Setiap uncang LDPE berukuran 2.5 cm × 2.5 cm dan diisi dengan satu mililiter konstituen kimia individu IB1. Ketebalan kepingan uncang LDPE yang digunakan untuk mengeluarkan sebatian penarik individu ialah 0.2 mm (99.6% asid propionik, 99.9% asid butanoik, 99% asid pentanoik, 99% asid 3-metilbutanoik, dan air suling), 0.1 mm (98% heptanoik). asid, 99.9% asid oktanoik), 0.03 mm (99% asid tetradekanoik dan 25% larutan ammonia), dan 0.05 mm (asid L-laktik (85%)). Bahan kimia telah dibeli daripada Sigma-Aldrich Corporation (SIAL: NASDAQ GS, Jerman), manakala air suling dibekalkan oleh Buyimpex Laboratory Equipment Suppliers Limited di Kisumu, Kenya.

Jalur nilon individu berukuran 26.5 cm × 1 cm direndam secara berasingan dalam satu mililiter setiap juzuk kimia pada kepekatan optimum (% v/v) 0.01% (asid propionik), 1% (asid butanoik), 0.0001% (asid pentanoik, heptanoik asid dan asid oktanoik), 0.000001% (asid 3-metil butanoik), 0.00025% (asid tetradekanoik), 2.5% (ammonia), 85% (asid laktik) dan 100% (air suling) [14,15]. Jalur nilon mengandungi 90% poliamida dan 10% spandeks. Asid tetradekanoik dan oktanoik dilarutkan dalam etanol manakala propionik, butanoik, pentanoik, heptanoik, asid 3-metilbutanoik dan ammonia dilarutkan dalam air suling. Jalur nilon yang dirawat telah dikeringkan dengan udara pada suhu bilik selama 5 jam sebelum permulaan eksperimen.

Karbon dioksida (kira-kira 63 ml/min) dihasilkan dengan mencampurkan 2 L paip (eksperimen separuh medan) atau air sungai (eksperimen lapangan), 17.5 g yis kering segera (Angel Company, China) dan 250 g gula halus ( Sony sugar Company Ltd, Kenya) 30 minit sebelum permulaan setiap eksperimen [15,21]. Gas ini dihantar melalui tiub silikon (diameter dalaman 0.5 cm) ke dalam perangkap MM-X (American Biophysics, North Kingstown, RI, USA) yang diumpan dengan adunan IB1. Sachet LDPE yang diisi dengan bahan kimia penarik individu ditimbang sebelum dan selepas setiap malam percubaan [8,15]. Sachet yang diisi dengan komponen hanya diganti apabila kebocoran atau kehabisan. Kekerapan penggantian berbeza dengan ketara antara komponen individu [15,24]. Walaupun jalur nilon kawalan dan rawatan IB1 telah disediakan sekali dan digunakan semula (tanpa penambahan) dalam semua eksperimen kajian ini, CO2 telah disediakan baru pada setiap malam percubaan [15]. Bilangan bersamaan 10 uncang LDPE dan jalur nilon yang tidak dirawat (iaitu kawalan/tanpa umpan bau) [12,23] serta 10 uncang LDPE yang dirawat IB1 dan jalur nilon digantung secara berasingan pada cangkuk dawai dan diletakkan di dalam tiub bau bau. perangkap MM-X (14).

Tarikan tahan lama An. gambiae untuk merawat nilon di bawah keadaan separa medan

Telah ditunjukkan bahawa jalur nilon yang diresapi atraktan terpikat An. gambiae nyamuk selama 40 malam berturut-turut tanpa rawatan semula [15]. Kajian susulan ini bertujuan untuk menyiasat sama ada kesan sisa ini boleh dihasilkan semula pada selang mingguan dalam tempoh satu tahun (iaitu 52 malam). Empat rawatan telah digunakan: (a) uncang LDPE kawalan (tiada umpan bau), (b) jalur nilon kawalan (tiada umpan bau), (c) uncang LDPE yang diisi dengan campuran IB1, dan (d) jalur nilon yang dirawat IB1. Eksperimen telah rawak dengan rawatan dan kedudukan perangkap pada setiap malam eksperimen. Rawatan individu telah dipasang dalam tiub keluar bau perangkap MM-X berasingan yang dikendalikan pada 12 V. Hujung keluar bau setiap perangkap digantung pada ketinggian 15 cm di atas tanah [25,26]. Perangkap MM-X mengeluarkan bau dan mengumpul nyamuk tertarik pada setiap rawatan. Nyamuk yang dikumpul tidak bersentuhan langsung dengan bahan nilon atau uncang LDPE yang diletakkan di dalam perangkap (14). Rawatan telah diberikan kepada perangkap tertentu sepanjang kajian dan bergantian setiap malam untuk mengatasi potensi kesan tapak pada tangkapan nyamuk [15,21]. Ujian perangkap untuk penilaian daya tarikan nyamuk terhadap empat rawatan telah direplikasi tiga kali seminggu selama satu tahun sejak impregnasi. Nyamuk yang dikumpul dalam perangkap individu pada akhir setiap malam percubaan telah dialih keluar, dikira dan direkodkan. Rawatan disimpan secara berasingan di dalam peti sejuk (4°C) antara malam percubaan. Nyamuk yang tidak terperangkap telah ditangkap semula dari rumah hijau berdinding skrin menggunakan penyedut manual dan dibunuh. Perangkap dibersihkan menggunakan larutan metanol 70% antara eksperimen. Suhu ambien dan RH semasa semua malam percubaan telah direkodkan menggunakan pembalak data (Tinytag Ultra, model TGU-1500, INTAB Benelux, Belanda).

Pengenalpastian sebatian yang terdapat pada jalur nilon satu tahun selepas rawatan

Kajian ini bertujuan untuk menentukan bahan kimia yang masih terdapat pada jalur nilon yang dirawat IB1 yang telah berulang kali digunakan untuk menarik An. gambiae nyamuk sekali seminggu untuk tempoh 52 malam tanpa rawatan semula. Pensampelan ruang kepala digunakan untuk mengumpul VOC yang dikeluarkan daripada tiga set jalur, setiap satu terdiri daripada 10 jalur nilon berasingan (4.5 cm × 1 cm setiap satu). Setiap jalur telah diresapi dengan satu komponen IB1 sahaja. Meruap telah dimasukkan menggunakan pembersihan dan perangkap pada Tenax-TA 20/35 (Markes International, Llantrisant, UK), daripada setiap sepuluh jalur nilon yang diresapi IB1 yang disatukan dalam bekas kaca 5 liter berasingan yang penutupnya dipasang dengan saluran masuk udara dan kedai-kedai. Untuk mengurangkan ketidakstabilan latar belakang, udara disedut ke dalam kuvet melalui kartrij kaca standard yang mengandungi 200 mg Tenax-TA [19]. Meruap ruang kepala telah dimasukkan pada kadar aliran 100 ml/min selama dua jam pada kartrij kedua yang mengandungi 200 mg Tenax-TA yang disambungkan ke alur keluar kuvet. Sampel dianalisis menggunakan desorpsi terma (TD) dengan kromatografi gas dan pengesanan spektrometri jisim (GC/MS). Surih Thermo GC ultra ditambah dengan surih Thermo DSQ dan spektrometer jisim (Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA) telah digunakan untuk pengasingan dan pengesanan sebatian meruap daripada jalur nilon.

Sebelum pembebasan bahan meruap, setiap sampel dibersihkan kering di bawah aliran nitrogen (20 ml/min) selama 10 minit pada suhu ambien untuk menghilangkan lembapan. Ini diikuti dengan pembebasan bahan meruap secara terma daripada bahan penjerap Tenax TA menggunakan unit desorpsi haba ultra 50:50 (Markes) pada 250°C selama 10 minit di bawah aliran helium sebanyak 20 ml/min, sambil mengumpul semula bahan meruap dalam penyejuk. perangkap pelarut pada 10°C menggunakan UNITY (Penanda). Setelah proses penyahsorpsian selesai, sebatian meruap dilepaskan daripada perangkap sejuk pada kadar pemanasan pantas 40°C/s hingga 280°C selama 10 minit. Meruap telah dipindahkan ke lajur analitik ZB-5MSi (30 mL × 0.25 mm ID × 1.00 μm FT (Phenomenex, Torrance, CA, USA)) dalam mod tanpa belah untuk pengasingan selanjutnya. Suhu ketuhar GC pada mulanya dipegang pada 40°C selama 2 minit dan selepas itu dinaikkan pada 10°C/min kepada suhu akhir 280°C dan disimpan malar selama 4 minit di bawah aliran helium 1 ml/min dalam aliran malar mod. Spektrometer jisim DSQ (MS) dikendalikan dalam mod imbasan dalam julat 35–350 amu pada 5.38 imbasan/s. Spektrum telah direkodkan dalam mod pengionan impak elektron (EI) pada 70 eV manakala garis pemindahan MS dan sumber ion masing-masing ditetapkan pada 275 dan 250°C. Pengenalpastian kompaun tentatif adalah berdasarkan perbandingan spektrum jisim dengan pustaka MS NIST 2005 dan Pangkalan Data Spektrum Jisim Wageningen untuk Produk Asli MS. Indeks pengekalan linear (LRI) yang dikira secara eksperimen juga digunakan sebagai langkah tambahan untuk mengesahkan identiti sebatian. Purata kawasan puncak yang diperolehi dalam sampel digunakan untuk menganggarkan banyaknya meruap individu. Meruap daripada udara termampat, balang kaca kosong, penjerap Tenax TA yang bersih dan sistem analisis itu sendiri telah dianggap sebagai sampel kosong dan digunakan untuk pembetulan semasa analisis.

Pengenalpastian bakteria yang terdapat pada nilon yang dirawat penarik

Tujuan kajian ini adalah untuk menentukan kehadiran dan identiti bakteria yang terdapat pada jalur nilon yang dirawat IB1 yang telah berulang kali digunakan untuk menarik nyamuk seminggu sekali selama satu tahun sejak rawatan. Semua jalur nilon yang dirawat (4.5 cm × 1 cm) dicoret secara berasingan pada plat Trypticase Soy Agar (TSA) dan diinkubasi semalaman pada suhu 34°C. Prosedur yang sama diulang dengan menggunakan jalur yang sama saiz dan potongan nombor daripada sekeping stokin nilon yang dipakai selama 12 jam oleh sukarelawan manusia dan mengawal jalur nilon (tidak dirawat). Spesies bakteria yang paling banyak diperoleh daripada koloni jalur nilon yang dirawat IB1 telah diasingkan dan dikenal pasti. Koloni bakteria telah dipetik daripada plat menggunakan hujung pipet steril dan dipindahkan ke penimbal lisis 20 μl (50 mM NaOH, 0.20% SDS) dalam 1.5 ml tiub Eppendorf. Selepas dipanaskan selama 15 minit pada suhu 95°C, setiap tiub diletakkan di atas ais diikuti dengan penambahan 200 μl air. Sampel telah disentrifugasi selama 5 minit pada 12,000 r/min sebelum menggunakan 0.5 μl supernatan dengan DNA untuk Reaksi Rantaian Polimerase (PCR). Sebelum amplifikasi untuk penjujukan, cap jari BOX-PCR [27] telah digunakan untuk mengesahkan bahawa koloni yang paling banyak pada plat adalah milik spesies yang sama. Penguatan dilakukan dengan menggunakan primer 16S rDNA universal fD1 dan rp2 [28,29]. Produk penguatan telah disusun menggunakan prosedur yang diterangkan sebelum ini [28,30] (Eurofins MWG Operon, Ebersberg, Jerman). Urutan 16S rDNA telah dibandingkan dengan yang terdapat dalam Alat Carian Penjajaran Tempatan Asas (//blast.ncbi.nlm.nih.gov) untuk mendedahkan identiti spesies tentatif bagi isolat bakteria.

Kesan bahan meruap yang dihasilkan bakteria pada tarikan An. gambiae dalam makmal

Tarikan daripada An. gambiae kepada bahan meruap yang dihasilkan oleh dua koloni bakteria paling banyak yang diasingkan daripada jalur nilon yang dirawat IB1 di bahagian sebelumnya telah dinilai. Kedua-dua pencilan ditanam semalaman dalam medium cecair (15 g tripton, 5 g soya dan 5 g natrium klorida/1000 ml H2O) pada 34°C sebelum menguji tindak balas tingkah laku individu mencari hos An. gambiae [19]. Medium cecair telah dicairkan kepada kepekatan optimum 263cfu/cm 2 dengan penyaduran pada TSA [19]. Daya tarikan bahan meruap yang dihasilkan oleh dua pencilan bakteria kepada strain Suakoko daripada An. gambiae s.s bentuk M. (baru-baru ini dinamakan semula An. colluzzii) nyamuk telah diuji dalam olfactometer dwi-port [19,31] di Makmal Entomologi, Universiti Wageningen, Belanda.

Bagi setiap ujian, 30 perempuan An. gambiae nyamuk berumur 5–8 d yang tidak menerima makanan darah, telah dipilih 14 jam sebelum eksperimen dan diletakkan di dalam sangkar pelepas yang mengandungi air paip yang dibentangkan pada bulu kapas lembap. Eksperimen telah dilakukan selama 4 jam terakhir scotophase. Dalam setiap percubaan, bau ujian dikeluarkan dalam aliran udara sebelum sekumpulan nyamuk dibebaskan dari sangkar yang diletakkan 1.60 m di bawah angin dari dua pelabuhan. Selepas 15 minit, nyamuk yang memasuki setiap satu daripada dua alat perangkap dikira dan direkodkan. Blok TSA yang dikeluarkan (1.5 × 1.5 × 0.3 cm) dengan atau tanpa bakteria diletakkan pada slaid kaca (1.5 × 1.5 cm) dan diletakkan di dalam setiap alat perangkap [19]. Setiap rawatan diuji empat kali selama dua hari. Urutan bau ujian secara rawak pada hari yang sama dan antara hari. Rangsangan ujian diselang-seli antara port kanan dan kiri olfactometer untuk menolak sebarang kesan kedudukan.

Kesan autoklaf pada tarikan An. gambiae kepada jalur nilon yang dirawat

Kajian ini direka bentuk untuk menentukan sama ada kehadiran fizikal bakteria pada jalur nilon yang dirawat IB1 yang diautoklaf dan kawalan akan menjejaskan daya tarikan makmal yang mencari hos. An. gambiae nyamuk. Kajian ini dicapai melalui bioassay dwi-pilihan rawak yang terdiri daripada (a) kawalan bukan autoklaf berbanding jalur nilon kawalan autoklaf, (b) kawalan tidak autoklaf berbanding jalur nilon dirawat IB1 diautoklaf, (c) kawalan tidak autoklaf berbanding bukan autoklaf. Jalur nilon dirawat IB1, (d) kawalan diautoklaf berbanding jalur nilon dirawat IB1 diautoklaf, (e) kawalan diautoklaf berbanding jalur nilon tidak diautoklaf, dan (f) kawalan tidak diautoklaf berbanding jalur nilon dirawat IB1 diautoklaf. Eksperimen telah rawak mengikut rawatan dan lokasi perangkap. Jalur nilon yang digunakan telah didedahkan sebelum ini untuk menarik nyamuk pada selang mingguan untuk tempoh 52 minggu selepas rawatan dalam persekitaran separa padang. Setiap bioassay dijalankan selama empat malam di dalam rumah hijau berdinding skrin. Jalur nilon yang dirawat dan dikawal oleh IB1 yang diautoklaf dan tidak diautoklaf untuk rawatan individu telah dibalut secara berasingan dalam kerajang aluminium dan disejukkan pada -4°C antara malam percubaan. Semasa autoklaf, jalur kawalan dan jalur nilon yang dirawat IB1 diletakkan secara berasingan dalam botol kaca 200 ml (Pyrex, England), dimeterai dan diautoklaf kepada 121°C pada 100 kPa (15 psi) selama 30 minit (Webeco Vertikal model BCH-stand, Jerman ) sebelum permulaan setiap eksperimen. Rawatan tanpa autoklaf dikekalkan pada suhu 4°C antara malam percubaan. Rawatan diselang-seli antara kedudukan perangkap dan digunakan berulang kali sepanjang tempoh kajian.

Rawatan yang sama digunakan untuk menyiasat kesan jalur nilon yang dirawat dengan autoklaf IBI pada tarikan nyamuk di bawah keadaan separa padang juga diuji di luar rumah (18:30–06:30 h) di kampung Kigoche selama 20 malam berturut-turut (Disember 2011 hingga Januari 2012 ) tanpa rawatan semula. Kajian lapangan ini dinilai melalui reka bentuk eksperimen persegi 4 × 4 Latin secara rawak mengikut rawatan dan lokasi rumah. Kampung Kigoche terletak berhampiran bandar Ahero di dataran Kano di Daerah Kisumu, barat Kenya [23]. Rawatan individu yang diberikan kepada perangkap MM-X yang ditentukan telah digantung di luar di bawah atap bersebelahan dengan bilik tidur rumah terpilih. Rawatan itu diselang-seli pada selang waktu malam di antara rumah eksperimen yang berbeza. Pada akhir setiap malam percubaan, nyamuk dewasa yang terperangkap dalam setiap perangkap dikumpulkan dan diangkut ke makmal lapangan yang terletak di Institut Latihan Pembangunan Serbaguna Ahero (AMDTI) untuk pengasingan dan pengiraan. Nyamuk yang dikumpul dari setiap perangkap dibunuh dengan pembekuan, dikenal pasti secara morfologi [32,33], dikira dan direkodkan berdasarkan jantina dan genus atau spesies (An. gambiae sensu lato, An. funestus, Culex spesies, Mansonia spesies, dan anophelines lain). Anophelines lain merujuk kepada spesies terperangkap Anopheles Selain itu An. gambiae s.l. dan An. funestus.

Kelulusan etika

Kajian ini telah diluluskan oleh jawatankuasa semakan etika Institut Penyelidikan Perubatan Kenya (KEMRI ERC NON-SSC No. 350). Dalam semua kes, tujuan dan prosedur kajian diterangkan kepada pemimpin tempatan, ketua isi rumah dan sukarelawan sebelum meminta kebenaran untuk menjalankan kajian. Eksperimen hanya dilakukan di rumah tempatan yang pemiliknya bersetuju selepas membaca dan memahami protokol kajian sebelum menandatangani dua salinan borang kebenaran bertulis yang diluluskan oleh jawatankuasa etika KEMRI. Satu daripada salinan disimpan oleh peserta manakala salinan kedua disimpan oleh projek.

Analisis data

Model logit kategori asas telah digunakan untuk menganalisis aktiviti sisa campuran IB1 pada tarikan An. gambiae nyamuk [34], manakala ujian χ 2 - digunakan untuk menganalisis bagi setiap ujian dua pilihan yang dijalankan dalam olfactometer dan rumah hijau berdinding skrin. Kesan autoklaf pada daya tarikan jalur nilon yang diresapi IB1 kepada nyamuk yang terperangkap semasa reka bentuk eksperimen 4 × 4 Latin secara rawak mengikut rawatan dan lokasi rumah telah dinilai dengan menggunakan Model Linear Umum (GLM) yang dipasang dengan taburan Poisson dan pautan logaritma fungsi [35,36]. Kesan rawatan dan kedudukan rumah terhadap tangkapan nyamuk telah diuji sebagai parameter dalam model. GLM diikuti dengan perbandingan berpasangan dengan pembetulan Perbezaan Kuasa Dua untuk menguji perbezaan dalam tindak balas kemasukan perangkap antara rawatan. Semua analisis dilakukan menggunakan perisian statistik IBM SPSS, versi 20.0.


Perbincangan

Dalam kajian ini, diperhatikan bahawa tindak balas yang dibesarkan di makmal An. gambiae s.s. nyamuk kepada campuran penarik rujukan MB5 dengan CO2 adalah jauh lebih tinggi berbanding MB5 sahaja, CO2 bersendirian atau perangkap tanpa umpan. Dalam semua penyiasatan separa lapangan MB5 + CO2 menarik bilangan nyamuk yang jauh lebih tinggi daripada variannya yang mengandungi pencairan berbeza 2-butanon yang digunakan untuk menggantikan CO2. Apabila menggunakan campuran MB5 + 2-butanon, tangkapan tertinggi dikaitkan dengan kepekatan 99.5% 2-butanon dan kepekatan 1.0% 2-butanon. Tangkapan keseluruhan daripada An. arabiensis adalah jauh lebih rendah daripada mereka An. gambiae di bawah keadaan separa medan, mungkin kerana campuran penarik meniru manusia telah dibangunkan dan disesuaikan menggunakan An. gambiae sebagai organisma ujian [25, 26] dan itu An. arabiensis mempunyai keutamaan hos yang lebih oportunistik [1]. Dalam kajian lapangan, An. gambiae s.l., An. funestus dan Culex spesies tertarik kepada kedua-dua MB5 + CO2 dan MB5 + 99.5% 2-butanon tanpa perbezaan ketara dalam saiz tangkapan antara adunan. Keputusan ini menunjukkan bahawa 2-butanon boleh digunakan sebagai pengganti CO2 di bawah keadaan lapangan.

Penemuan bahawa lebih banyak nyamuk yang diternak di makmal telah tertarik kepada MB5 + CO2 daripada MB5 sahaja (P < 0.001), CO2 sahaja (P< 0.001) atau perangkap tanpa umpan (P< 0.001) menggariskan tindakan CO2 sebagai sinergi dalam penarik nyamuk [21, 29]. Gas diketahui mengaktifkan nyamuk dengan menimbulkan tingkah laku berlepas dan mengekalkannya dalam penerbangan mencari hos [6, 7, 30]. Penemuan ini adalah selaras dengan hasil kajian yang menunjukkan bahawa sebatian lebih menarik kepada nyamuk yang mencari hos apabila diadun berbanding apabila digunakan secara bersendirian [31].

Telah diperhatikan bahawa bentuk tulen (99.5%) 2-butanon adalah pengganti yang berpotensi untuk CO2 dalam penarik nyamuk. Di bawah keadaan lapangan tidak terdapat perbezaan antara bilangan An. gambiae s.l. dan An. funestus nyamuk tertarik kepada MB5 + CO2 berbanding dengan MB5 + 99.5% 2-butanon. 2-butanone ialah produk semula jadi yang dikenal pasti dalam pancaran pelbagai vertebrata dan arthropod [32, 33] dan beberapa serangga menyatakan tindak balas tingkah laku apabila terdedah kepada sebatian ini. Dua kajian berasingan [34, 35] telah melaporkan bahawa sel reseptor penciuman lalat buah Bactrocera tyoni yang bertindak balas kepada CO2 juga bertindak balas kepada 2-butanon. Dan baru-baru ini, Turner et al. [14] menunjukkan kapasiti 2-butanon untuk mendorong pengaktifan CO yang bergantung kepada dos2 neuron reseptor dalam palps maksila An. gambiae, Aedes aegypti dan Culex quinquefasciatus. Kegagalan untuk memerhatikan kesan ini di bawah keadaan separa medan mungkin membayangkan bahawa 2-butanon bertindak sebagai jarak jauh dan bukannya isyarat jarak pendek atau sederhana atau kedekatan alternatif yang lebih menarik (MB5 + CO2) lebih disukai apabila nyamuk dibentangkan dengan pilihan langsung. Tambahan pula, tiada perbezaan statistik dalam bilangan An. funestus tertarik kepada MB5 + CO2 atau MB5 + 2-butanone (99.5%) di bawah keadaan lapangan, tetapi kerana koloni spesies nyamuk ini belum ditubuhkan di stesen penyelidikan di Mbita, tindak balas spesies ini di bawah keadaan separa medan tidak dapat diuji.

Bilangan jantan liar yang agak tinggi An. gambiae s.l. dan An. funestus nyamuk dalam perangkap yang diumpan dengan campuran bau sintetik adalah bertentangan dengan jangkaan kerana jantan adalah fitofag dan dianggap tidak mungkin bertindak balas terhadap campuran bau yang dicari oleh tuan rumah berbanding dengan nyamuk betina [3, 37]. Ia mungkin diandaikan bahawa jantan mengejar betina untuk mengawan, jika sifat sejarah hidup ini pernah berlaku di dalam rumah tanpa berkerumun. Pada masa ini, terdapat keperluan mendesak untuk campuran bau sintetik yang kuat untuk pensampelan dan kawalan nyamuk jantan. Campuran sedemikian boleh digunakan untuk mengurangkan kejayaan mengawan, dan juga untuk mengurangkan bilangan nyamuk betina gravid dan kelaziman penyakit bawaan nyamuk. Kerana prospek menghapuskan malaria sebahagian besarnya terancam oleh perkembangan pesat kebal dadah Plasmodium parasit dan vektor malaria yang tahan racun serangga, alat baru diperlukan. Teknologi perangkap berumpan bau telah digunakan dengan jayanya di barat Kenya untuk mengurangkan gigitan nyamuk dan kelaziman malaria [38]. Bilangan nyamuk di sekeliling rumah telah dikurangkan dengan penggunaan besar-besaran perangkap luar yang diumpan dengan MB5 ditambah dengan 2-butanon dan bukannya CO.2 [36, 38]. Perangkap berumpan telah digunakan secara berkesan dan berulang kali untuk membuang perangkap nyamuk yang menggigit luar. Walaupun daya tarikan sisa nyamuk kepada sebatian sintetik yang diresapi pada jalur nilon telah dilaporkan [23], kajian serupa diperlukan untuk penarik nyamuk yang ditambah dengan 2-butanon. Umpan bau dengan sisa aktiviti dalam tempoh yang lama tanpa memerlukan pengisian semula yang kerap akan memudahkan pemantauan dan juga penyingkiran perangkap nyamuk di kawasan terpencil di sub-Sahara Afrika.

Tangkapan pendaratan manusia, perangkap cahaya, kelambu yang diduduki oleh manusia, tangkapan semburan pyrethrum, dan tangkapan pendaratan manusia biasanya digunakan untuk pensampelan vektor malaria dan anggaran intensiti penghantaran malaria [39]. Kaedah berbeza dari segi kebolehpercayaan dan keberkesanan, justeru keperluan untuk alat piawai yang sensitif, khusus, boleh dipercayai dan boleh diterima dari segi etika untuk memerangkap dan mengambil sampel vektor malaria. Kajian terbaru menunjukkan bahawa umpan bau sintetik yang dikeluarkan oleh perangkap MM-X boleh digunakan dengan pasti untuk mengumpul sampel hidup dan spesis spesifik kedua-dua malaria menggigit dalaman dan luaran dan vektor nyamuk lain, terutamanya yang mencari hos [13, 18, 29] . Oleh itu, adalah penting untuk membandingkan campuran bau, diduga CO2 perangkap gantian dan berumpan bau yang digunakan dalam kajian semasa dengan alat perangkap biasa yang digariskan di atas.


Abstrak

Dalam kajian ini, Carifend ® jaring bersalut alpha-cypermethrin, telah dinilai untuk kawalan Lasioderma serricorne dan Ephestia elutella in semi-field and field tests in two storage facilities. In the semi-field tests, three Carifend ® Multi-Cubicles (CMCs), within which one carton box filled with tobacco was placed, were suspended in three separate rooms. Two MoBe traps were placed, one inside and one outside of each CMC. Three additional tobacco quantities in similar carton boxes, with a MoBe trap on them, were placed in three separate adjacent rooms and served as controls. In each room, 50 L. serricorne and 50 E. elutella adults were released outside of each tobacco quantity and the traps were inspected at weekly intervals for 3 weeks. A similar approach was followed in the field test conducted in a commercial tobacco storage facility. However, no insects were released and the test was based on the naturally-occurring immigrations of populations of E. elutella dan L. serricorne from outside the facility or from unprotected tobacco. In semi-field tests, significantly more adults were captured in the first week in the control traps compared to counts from CMCs, either inside or outside. However, differences were significant only in the case of E. elutella. Only one single L. serricorne individual was found in the traps that had been placed inside CMCs, whereas no adult E. elutella were detected inside CMCs. In the field-test, traps that had been placed inside the CMCs captured only 3 and 1 adults of E. elutella dan L. serricorne, respectively, during the entire survey period. Results of this study show that Carifend ® is highly effective for the control of both species on stored tobacco, and could be further successfully utilized as an alternative method over the use of traditional insecticidal treatments (such as repeated fumigations of phosphine gas) on tobacco.


Beneficial symbionts in olive fruit fly and related species

Tephritid species have established symbiotic associations with a variety of bacterial and fungal species (Petri, 1909 Mazzon et al., 2008 Andongma et al., 2015 Augustinos et al., 2015 Ben-Yosef et al., 2015 Morrow et al., 2015 Hadapad et al., 2016 ). Although less is known about the function of fungi compared to bacteria, inactivated yeasts are applied successfully to the artificial diet of tephritids (Cohen, 2003 ) and are common attractors in tephritid baits (Bortoli et al., 2016 ). This indicates that yeast is important for nutrition in wild tephritids as well, just as yeast and yeast-like fungi are in Drosophilidae (Vega & Blackwell, 2005 Hamby & Becher, 2016 ). Associated cultivable yeasts have been identified in Bactrocera tryoni (Froggatt) (Deutscher et al., 2017 ) and the total gut fungal microbiome has been investigated in wild B. oleae (Malacrinò et al., 2015 ).

Medfly is the model species in the Tephritidae family. Bacterial communities vary between medfly strains and populations, and can vary among life stages (Aharon et al., 2013 ), particularly when exposed to different environments. These shifts in community composition may allow medfly to feed on various host plants (Aharon et al., 2013 ). Medfly symbionts are typically taken up from the environment, but can also be passed on via vertical transmission (Behar et al., 2008a Ben Ami et al., 2010 ). Besides passing on the bacteria, the female medfly also provides eggs with an antibiotic substance during oviposition (Marchini et al., 1991 ), which is probably meant to ward off pathogenic bacteria and select for the beneficial symbionts. The medfly is known to be associated with bacterial species predominantly from the Enterobacteriaceae family (Enterobacter, Klebsiella, dan Pectobacterium spesies). The core bacteria of medfly are diazotrophic (atmospheric nitrogen fixators) and pectinolytic (hydrolysers of pectin substances in plants) and seem to help by accelerating fruit decay and providing nitrogen for the larva as soon as they are inoculated by the adult by oviposition (Behar et al., 2005 , 2008a ). Bacteria also affect survival depending on the nutrients the fly receives (Behar et al., 2008b ). The benefit of medfly symbionts can be diet dependent: when enough food is present some are beneficial by accumulating fats and improve mating success, but when food is scarce those bacteria may have a negative effect (Behar et al., 2008b ). It has also been demonstrated that mass rearing and irradiation may adversely affect bacterial communities in medfly, by increasing the density of potentially pathogenic Pseudomonas species (Ben Ami et al., 2010 ).

Similar to related tephritid species, B. oleae possesses several symbiotic-supporting devices (Petri, 1909 Girolami, 1973 , cited in Sacchetti et al., 2014 ), with ceca connected to the larval midgut which can grow and store bacteria, an oesophageal bulb with the same capabilities in adults, and additionally an ovipositor diverticulum in adult females. These specialized organs suggest that the fly and the symbiont(s) have a tight evolutionary bond and are in close symbiosis, in which the bacteria provide benefits for the survival of the fly and vice versa. Even though the exact transmission mechanism has not yet been elucidated, the presence of the ovipositor diverticulum and the bacteria covering the egg suggest vertical transmission (Stammer, 1929 Sacchetti et al., 2008 Estes et al., 2009 ).

Various bacterial species have been reported in association with B. oleae over the years (Table 2). Recent studies have clearly demonstrated that the major symbiont of B. oleae ialah Candidatus Erwinia dacicola, a non-cultivable γ-proteo-bacterium, which is present both intra- and extracellularly (Capuzzo et al., 2005 Estes et al., 2009 , 2012 Kounatidis et al., 2009 Savio et al., 2012 Ben-Yosef et al., 2014 , 2015 ). Selain daripada Ca. E. dacicola, several bacterial species have been detected in laboratory and natural populations of olive fruit fly. These are summarized in the review by Estes et al. ( 2011 ), but additional studies were done since by Savio et al. ( 2012 ), Estes et al. ( 2012 ), and Ben-Yosef et al. ( 2014 , 2015 ). In wild flies, these symbionts are mostly found in low densities (Ben-Yosef et al., 2015 ), and are suggested to be transient (Estes et al., 2011 ). The most dominant species are members of Enterobacteriaceae, for instance, Enterobacter (Stamopoulos & Tzanetakis, 1988 Estes et al., 2009 ), Klebsiella (Tsiropoulos, 1983 Konstantopoulou et al., 2005 ), Pantoea (Ben-Yosef et al., 2015 ), and Serratia (Tsiropoulos, 1983 Konstantopoulou et al., 2005 ), which are commonly associated with fruit digestion in other fruit fly species (Drew & Lloyd, 1991 Behar et al., 2008a Ben-Yosef et al., 2010 , 2015 ).

tahun SIT and rearing milestones Bacteria ID studies Microbiology milestones
1909 First bacteria identifieda a Isolation of bacteria through culturing plus morphological and/or biochemical identification of cultivable bacteria.
Petri ( 1909 ) Intensive study of symbiotic device, description of vertical transmission Petri ( 1909 )
1956 Wild adult fliesa a Isolation of bacteria through culturing plus morphological and/or biochemical identification of cultivable bacteria.
Hellmuth ( 1956 )
1963 Elaborate study on B. oleae rearing under laboratory conditions for SIT Hagen et al. ( 1963 )
1966 Successful sterilisation and first field trial with sterilized flies Tzanakakis et al. ( 1966 ) Orphanidis et al. ( 1966 ) Symbiont needed for protein and unripe olive digestion Acidophilus spec. cannot replace all functions of the original symbiont but can provide two essential amino acids Hagen ( 1966 )
1973 Antibiotics inhibit larval development Tzanakakis & Stavrinides ( 1973 )
1975 Current larval diet defined Tsitsipis ( 1975 )
1977 Laboratory adultsa a Isolation of bacteria through culturing plus morphological and/or biochemical identification of cultivable bacteria.
Haniotakis & Avtzis ( 1977 )
1982 Summary of research on SIT, mentioning its problems Economopoulos & Zervas ( 1982 )
1983 Current adult diet defined Tsitsipis & Kontos ( 1983 ) Wild and laboratory adultsa a Isolation of bacteria through culturing plus morphological and/or biochemical identification of cultivable bacteria.
Tsiropoulos ( 1983 )
1988 Wild adults Stamopoulos & Tzanetakis ( 1988 )
1991 Phylloplane Ercolani ( 1991 )
1999 Antibiotics influence allele frequencies in laboratory flies Konstantopoulou et al. ( 1999 ) Host–bacterial interactions affect development and detection of Adh alleles Konstantopoulou et al. ( 1999 )
2003 Wild and laboratory adults and phylloplane Belcari et al. ( 2003 )
2005 Wild adultsb b Isolation of bacteria through culturing plus 16S rRNA gene-based identification, including Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE of cultivable bacteria.
, c c Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, PCR, cloning, and screening of libraries, through Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE.
Capuzzo et al. ( 2005 ) Uncultivable Ca. Erwinia dacicola found as the main symbiont Capuzzo et al. ( 2005 )
Laboratory and wild pupaea a Isolation of bacteria through culturing plus morphological and/or biochemical identification of cultivable bacteria.
Konstantopoulou et al. ( 2005 ) Host–bacterial interactions affect development and detection of Adh alleles Konstantopoulou et al. ( 2005 )
2007 Fly attraction to microbes Landini et al. ( 2007 ) Sacchetti et al. ( 2008 )
2008 Laboratory adults and wild pupae Chrysargyris ( 2008 )
2009 Laboratory pupae and adults, wild larvae, pupae, and adultsb b Isolation of bacteria through culturing plus 16S rRNA gene-based identification, including Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE of cultivable bacteria.
, c c Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, PCR, cloning, and screening of libraries, through Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE.
Estes et al. ( 2009 ) Ca. E. dacicola goes intracellular during larval metamorphosis, and is dominant in all life stages in wild and olive-reared flies Estes et al. ( 2009 )
Laboratory adults and wild larvae Estes ( 2009 ) Fewer, other, or no symbionts found in laboratory flies compared to wild flies Estes et al. ( 2009 ) Kounatidis et al. ( 2009 )
Laboratory pupae and larvae, wild adultsb b Isolation of bacteria through culturing plus 16S rRNA gene-based identification, including Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE of cultivable bacteria.
, c c Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, PCR, cloning, and screening of libraries, through Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE.
Kounatidis et al. ( 2009 ) Acetobacter tropicalis is present in Greek natural and laboratory populations Kounatidis et al. ( 2009 )
2011 Reviewing previous knowledge with intent to try SIT again Estes et al. ( 2011 )
2012 Laboratory pupae and adults olive and non-olive reared, wild larvae, pupae, and adultsc c Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, PCR, cloning, and screening of libraries, through Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE.
Estes et al. ( 2012 )
Wild adultsc c Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, PCR, cloning, and screening of libraries, through Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE.
Savio et al. ( 2012 )
2014 Adult diet without antibiotics is not problematic in non-mass-rearing situation Rempoulakis et al. ( 2014 ) Probiotic diet has positive effect on adult females Sacchetti et al. ( 2014 )
Wild larvae, pupae, and adultsb b Isolation of bacteria through culturing plus 16S rRNA gene-based identification, including Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE of cultivable bacteria.
, d d Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, preparation of 16S rRNA libraries (not cloning), and Next Generation Sequencing.
Ben-Yosef et al. ( 2014 ) Symbionts can also create essential amino acids from urea Ben-Yosef et al. ( 2014 )
2015 Laboratory adults, wild larvae, and adultsd d Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, preparation of 16S rRNA libraries (not cloning), and Next Generation Sequencing.
Ben-Yosef et al. ( 2015 ) Ca. E. dacicola most probably responsible for counteracting oleuropein herbivory-protective effect in olive mechanism described Ben-Yosef et al. ( 2015 )
2016 Wild adult females and larvaeb b Isolation of bacteria through culturing plus 16S rRNA gene-based identification, including Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE of cultivable bacteria.
, e e Culture-independent approach, based on whole-genome characterization: it uses single-cell genomics technology to assemble whole bacteria genomes.
Blow et al. ( 2016 ) Draft genome of Ca. E. dacicola Blow et al. ( 2016 )
  • a Isolation of bacteria through culturing plus morphological and/or biochemical identification of cultivable bacteria.
  • b Isolation of bacteria through culturing plus 16S rRNA gene-based identification, including Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE of cultivable bacteria.
  • c Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, PCR, cloning, and screening of libraries, through Sanger sequencing and/or PCR-RFLP and/or DGGE.
  • d Culture-independent approach, using a 16S rRNA gene-based characterization: it includes total DNA extraction, preparation of 16S rRNA libraries (not cloning), and Next Generation Sequencing.
  • e Culture-independent approach, based on whole-genome characterization: it uses single-cell genomics technology to assemble whole bacteria genomes.
  • RFLP, Restriction Fragment Length Polymorphism (detects differences in the gene by the presence of fragments of different lengths after digestion of the sequence with one or more restriction endonucleases) DGGE, Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (detects differences in DNA fragments induced by denaturing conditions within a sequence according to their mobility on an agarose gel).

It has been reported that B. oleae (as well as its close tephritid relatives) cannot survive under sterile laboratory conditions unless its artificial larval diet contains hydrolysed proteins (Hagen et al., 1963 ). This clearly suggests that microorganisms are somehow essential and play a role in digestion in natural populations. Fungsi utama B. oleae symbionts seems to be to provide the fly with the ability to digest unripe olives. This is evident when the bacteria are removed with antibiotics, which causes inability to digest unripe olives and non-hydrolysed proteins (Hagen, 1966 Ben-Yosef et al., 2015 ). The bacteria seem to produce essential amino acids by converting proteins and non-essential amino acids (Ben-Yosef et al., 2010 ) and additionally help to overcome the olive's protective compound oleuropein in unripe olives (Ben-Yosef et al., 2015 ), as supported by a recent transcriptomic study (Pavlidi et al., 2017 ). Sebagai tambahan, B. oleae without symbionts becomes more prone to infections by pathogenic microbes (Cavalloro & Girolami, 1968 , cited in Estes et al., 2011 ), suggesting a protective function of the symbionts.


Keputusan

A total of 7265 insects were collected from the Ambohidray site, of which 2989 and 4276 were captured in control and baited traps respectively. These insects were represented by five orders, including Diptera, Lepidoptera, Coleoptera, Hymenoptera and Hemiptera. Among the Diptera, 5010 (69%) were mosquitoes belonging to the family Culicidae, of which 2002 (40%) were captured in control traps and 3008 (60%) in baited traps. In this family, two genera: Culex dan Anopheles telah dikenalpasti. Jumlah bilangan Anopheles collected was 3384 (68%) of which 1348 (39.8%) in the control traps and 2036 (60.2%) in the baited traps (Fig. 1).

Total number of insects, mosquitoes and Anopheles spp. caught in control and baited traps in the village of Ambohidray.

Statistically, no significant differences were observed between the mean numbers of insects, mosquitoes and Anopheles spp. in the baited trap and those captured in the control trap (P > 0.05) for all products tested. Untuk Culex, three species were caught including Cx. decens, Cx. tritaeniorynchus dan Cx. giganteus. Dalam kes Anopheles, three species were identified morphologically: An. squamosus, An. coustani, An. mascarensis dan juga An. gambiae complex or An. gambiae s.l was also captured, but not identified at species level. The total numbers of Anopheles gambiae s.l, dan Anopheles species collected in the control and baited traps are shown in (Table 1).

Average number of mosquitoes and Anopheles spp. in baited traps

The average number of mosquitoes in baited traps was significantly different (F = 8.44, P < 0.001) for tested products. We observed two phenomena simultaneously: a decrease in insect captures that was associated with the duration of trapping. Lagi Anopheles malaria vectors were captured in the baited traps compared to the control in all cases. The LSD multiple comparison test showed that traps baited with 4-hydroxycoumarin (2 mg) within the first trapping days and octenol (2 mg) in the second trapping period had the highest mean number of mosquitoes captured, 213 and 234 individuals, respectively. They were followed by 4-hydroxycoumarin (10 mg) with an average of 152 individuals during the third trapping period. The lowest number of captured mosquitoes was observed during the fourth and the fifth trapping period in the presence of the product combinations: 4-hydroxycoumarin (10 mg) plus octenol (2 mg) and 4-hydroxycoumarin (10 mg) plus octenol (2 mg) plus CO2. There were less than 30 individual mosquitoes captured with these blends however, these tests were performed at the end of the field experiment.

Significant differences were also observed for the average number of Anopheles spp. including anthropophilic and zoophilic species in the baited traps of the different products (F = 7.52, P < 0.001). LSD analysis showed that the traps with octenol (2 mg) had the highest average number of Anopheles spp. with 175 individuals, followed by 4-hydroxycoumarin with a mass of 2 mg and 10 mg with 114 and 128 individuals, respectively. As in the previous results, the mean number of Anopheles spp. was lower in the two combinations: 4-hydroxycoumarin (10 mg) plus octenol (2 mg) and 4-hydroxycoumarin (10 mg) plus octenol (2 mg) plus CO2 with only 10 and 20 individuals, respectively.

Comparison of average number of mosquitoes in control and baited traps

The effect of the tested products on the number of Anopheles vectors captured was examined and significant differences were observed between the number of the two malaria vectors together: An. gambiae s.l tambah lagi An. mascarensis in the control and baited traps for the first test (P < 0.001) for 4-hydroxycoumarin (2 mg). The mean number of An. gambiae s.l tambah lagi An. mascarensis in the baited trap was significantly higher with 30 individuals than that recorded in the control trap with 5 individuals. Similar results were also observed in the presence of 4-hydroxycoumarin (10 mg) in combination with octenol (2 mg) (P < 0.001) with a mean number of 5 individuals captured in the baited trap and 0 individual in the control trap. In the case of the other compounds, analysis showed no significant difference between the mean number of malaria vectors in the control and baited traps specifically because their number became too small.

Untuk setiap Anopheles species, results showed that there were significant differences between the mean number of An. gambiae s.l in both traps (P < 0.001) for 4-hydroxycoumarin (2 mg). The mean number of An. gambiae s.l in the baited trap was significantly higher with 24 individuals than that recorded in the control with 5 individuals. Similar results were also observed for the species An. mascarensis (P = 0.04) with the same compound using the same amount of 2 mg with a mean number of 7 individuals recorded in the baited trap and 0 individual in the control trap. It was the same in the case of An. gambiae s.l in the presence of the 4-hydroxycoumarin (10 mg) plus octenol (2 mg) combination (P = 0.012) (Fig. 2). Untuk An. coustani dan An. squamosus, statistically there was no significant difference between the mean number of mosquito individuals in the control and baited traps for all tested products.

Average (±SD) of the number of An. gambiae s.l, dan An. mascarensis captured in control and baited traps. Asterix in the graph denotes that the mean number of individuals in baited traps is significantly higher than that in control traps at P < 0.05 berdasarkan t-test analisis.

Comparing the mean number of individuals caught in the baited traps for each Anopheles species, analysis showed that statistically there were significant differences between the mean number of An. gambiae s.l for the different tested products (F = 18.48, P < 0.0001). The highest mean was recorded in the first test using 4-hydroxycoumarin (2 mg) with 24 individuals. It was lower for blend 4-hydroxycoumarin (10 mg), octenol (2 mg) and CO2 with only 2 individuals. Similar results were also observed for An. mascarensis (F = 3.75, P = 0.01) dan An. squamosus (F = 9.34, P < 0.001) with respectively 7 and 33 individuals on average for 4-hydroxycoumarin (2 mg). Dalam kes An. coustani, significant difference was also observed between the mean number of individuals for the different tested products (F = 4.71, P = 0.007) but the highest average was recorded for octenol (2 mg) with 131 individuals.

Kairomone index

For 4-hydroxycoumarin (2 mg), the kairomone index was almost negligible for mosquitoes. It was less than 7%. This was especially observed for Anopheles spp. However, the KI was higher for the malaria vectors: An. gambiae s.l tambah lagi An. mascarensis with 70%. For the same product but with a mass of 10 mg, KI for mosquitoes and Anopheles spp. were close to 50%. For malaria vectors, KI was 48%. Similar results were observed in the second test, octenol (2 mg), but the KI for mosquitoes, Anopheles spp. and malaria vectors ranged from 20% to 28% indicating no selectivity for malaria vector species. For the blend 4-hydroxycoumarin (10 mg) and octenol (2 mg), the KI for malaria vectors was higher with 72%, although of that Anopheles spp. was 25%. For mosquitoes, KI was very low with only 9%. The KI for mosquitoes was very low also in the case of the blend 4-hydroxycoumarin (10 mg), octenol (2 mg) and CO2. In this combination, KI of Anopheles spp. and malaria vectors were 24% and 33%, respectively.

Untuk An. gambiae s.l, kairomone indexes were higher for 4-hydroxycoumarin (2 mg) and the blend 4-hydroxycoumarin (10 mg) and octenol (2 mg) with 64% and 70%, respectively. For 4-hydroxycoumarin (10 mg), KI of this An. gambiae complex was 48%. KI were low for octenol (2 mg) and the blend 4-hydroxycoumarin (10 mg), octenol (2 mg) and CO2 with less than 33%. Untuk An. mascarensis, Kairomones indexes were very higher for 4-hydroxycoumarin (2 mg) and the blend 4-hydroxycoumarin (10 mg) and octenol (2 mg) with 95% and 100%, respectively. In contrast, KI of An. mascarensis were zero for the other products (Fig. 3).

Kairomone indexes (%) of An. gambiae s.l, dan An. mascarensis for all tested products.

On average, the temperature recorded at the site during this study was about 19.8 °C and the relative humidity was around 81.8%. Statistically, no significant differences were observed between the averages of relative humidity during this experiment. A similar result was also found for the averages of temperature. However, temperatures observed in the last two sampling periods appeared to be lower than the others around 17 °C (Fig. 4).

Averages (±SD) Temperature (°C) and relative humidity (%) recorded during the sampling periods.


Ucapan terima kasih

We are grateful to the community in the villages in Ulanga and Kilombero district for their participation in the study. We thank all our Ifakara Health Institute colleagues for their support during the work. We would like to extend our sincere gratitude to Prof. George Corliss for his constructive comments and English revision of this manuscript. EPAB was funded by the Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) (Grant 88881.133584/2016-01) and AEE funded by the Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico of the Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (CNPq/MCTI) (Grant 310205/2014-0) and Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) (Grant PPM-00502-15). FOO was funded by a Wellcome Trust Intermediate Research Fellowship (Grant WT102350/Z/13/Z) and a Visiting Researcher Fellowship from CNPq/MCTI (Grant 42070/2013-2).


Tonton video: Perangkap nyamuk merk Idealife dan Lingtingzhe review and test (Disember 2022).