Maklumat

13.33: Darah - Biologi

13.33: Darah - Biologi


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Apakah sebenarnya darah?

Semua sel anda memerlukan oksigen, kerana oksigen adalah akseptor elektron terakhir semasa respirasi sel. Bagaimana mereka mendapat oksigen ini? Dari darah. Sel darah mengalir melalui saluran sistem peredaran manusia. Tetapi apa sebenarnya darah? Ia mengangkut oksigen, tetapi juga mempunyai fungsi lain.

Darah

Darah adalah tisu penghubung cecair. Ia beredar ke seluruh badan melalui saluran darah dengan tindakan mengepam jantung. Darah di arteri membawa oksigen dan nutrien ke seluruh sel badan. Darah dalam urat membawa karbon dioksida dan sisa lain dari sel-sel untuk diekskresikan. Darah juga mempertahankan tubuh daripada jangkitan, membaiki tisu badan, mengangkut hormon, dan mengawal pH badan.

Komposisi Darah

Bahagian cecair darah dipanggil plasma. Ini adalah cairan kuning keemasan berair yang mengandungi banyak zat terlarut dan sel darah. Jenis sel darah dalam plasma termasuk sel darah merah, sel darah putih, dan platelet (lihat Gambar di bawah).

Sel dalam darah termasuk sel darah merah, sel darah putih, dan platelet.

  • Trilion daripada sel darah merah dalam plasma darah membawa oksigen. Sel darah merah mengandungihemoglobin, protein dengan zat besi yang mengikat dengan oksigen. Sel darah merah dibuat dalam sumsum tulang panjang, tulang rusuk, tengkorak, dan vertebra. Sel-sel ini bertahan selama kira-kira 120 hari, dan kemudiannya dimusnahkan. Sel darah merah yang matang kekurangan nukleus dan organel lain, memungkinkan lebih banyak hemoglobin, dan oleh itu lebih banyak oksigen dibawa oleh setiap sel.
  • sel darah putih umumnya lebih besar daripada sel darah merah tetapi jumlahnya jauh lebih sedikit. Mereka mempertahankan badan daripada bakteria asing, virus dan patogen lain. Sebagai contoh, sel darah putih dipanggil fagosit menelan dan memusnahkan mikroorganisma dan serpihan dalam darah, neutrofil menelan bakteria dan parasit lain, dan limfosit melawan jangkitan yang disebabkan oleh bakteria dan virus.
  • Platelet adalah serpihan sel yang terlibat dalam pembekuan darah. Mereka melekat pada air mata dalam saluran darahdan antara satu sama lain, membentuk palam di tapak kecederaan. Mereka juga mengeluarkan bahan kimia yang diperlukan untuk pembekuan berlaku.

Jenis darah adalah ciri genetik yang berkaitan dengan kehadiran atau ketiadaan molekul tertentu, yang disebut antigen, pada permukaan sel darah merah. Jenis darah yang paling dikenali adalah jenis darah ABO dan Rhesus.

  • jenis darah ABO ditentukan oleh dua antigen biasa, selalunya dirujuk sebagai antigen A dan B. Seseorang mungkin mempunyai jenis darah A (hanya antigen A), B (hanya antigen B), AB (kedua-dua antigen), atau O (tiada antigen).
  • Jenis darah Rhesus ditentukan oleh satu antigen biasa. Seseorang mungkin mempunyai antigen (Rh+) atau kekurangan antigen (Rh-).

Jenis darah adalah penting untuk sebab perubatan. Seseorang yang memerlukan pemindahan darah mesti menerima darah yang sama jenisnya dengan darah miliknya. Jika tidak, darah yang ditransfusikan boleh menyebabkan tindak balas yang berpotensi mengancam nyawa dalam aliran darah pesakit.

Ringkasan

  • Darah adalah tisu penghubung cairan yang mengandungi komponen cair yang disebut plasma.
  • Darah juga mengandungi bahan terlarut dan sel darah.
  • Sel darah merah membawa oksigen, sel darah putih mempertahankan badan, dan platelet membantu pembekuan darah.

Semakan

  1. Apakah jenis tisu darah?
  2. Kenal pasti tiga jenis sel darah dan fungsinya.
  3. Orang dengan darah jenis O disebut "penderma sejagat" kerana mereka dapat menderma darah kepada orang lain, tanpa mengira jenis darah ABO mereka. Terangkan mengapa.

Sistem Kumpulan Darah H

Marion E. Reid PhD, FIBMS, DSc (Hon.) ,. Martin L. Olsson MD, PhD, dalam Buku Fakta Antigen Kumpulan Darah (Edisi Ketiga), 2012

Asas molekul H- fenotip dalam rembesan

Perbezaan daripada FUT2 *01 alel rujukan (Nombor akses U17894) diberikan.

Nama alelExonNukleotidaAsid aminoEtnik (kelaziman)
FUT2 * 01N.012244G>A 385A>TAla82Thr Ile129PheMongolia (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.022428G>A ^ Trp143BerhentiEropah, Afrika, Iran (Umum)
FUT2 * 01N.032569G>AArg190NyaTurki (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.042571C>TArg191HentikanJepun, Filipina Polinesia, Taiwan (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.052628C>TArg210BerhentiJepun (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.062658C>TArg220BerhentiCina, Taiwan (Jarang)
FUT2 * 01N.072664C>TArg222CysNew Guinea (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.082685_686delGT230fs234 BerhentiTaiwan (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.092688_690delGTCVal230delFilipina (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.102400G>A 760G>AVal134Ile Asp254AsnNew Guinea (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.112778delC259fs275BerhentiAfrika Selatan (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.122849G>ATrp283BerhentiFilipina, Taiwan (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.132868G>AGly290ArgNew Guinea (Jarang berlaku)
FUT2 * 01N.142950C>TPro317LeuMongolia (Jarang berlaku)
FUT2 * 0N.01 penghapusan gen Bangladesh (Jarang berlaku)
FUT2*0N.02 wilayah pengekodan dihapus ^^ India (Beberapa)
FUT2 * 0N.03 gen gabungan 1 antara FUT2 dan Sec1 Jepun (Jarang)
FUT*0N.04 gen gabungan 2 antara FUT2 dan Sec1 Mongolia (Jarang berlaku)

Biokimia Interaksi Medium Karbohidrat Glycoconjugate Glycans

3.03.10.1 α2-Fuc-Transferases

FUT1, yang dikodkan oleh gen H dalam tisu hematopoietik, dan FUT2, yang dikodkan oleh gen rembesan Se dalam sel perembesan epitelium dan mukus, mensintesis penentu H (kumpulan darah O). 199,200 Kedua-dua FUT1 dan -2 bertindak ke atas sisa Gal daripada N-acetyllactosamines. Walau bagaimanapun, FUT2 lebih suka struktur teras 1 sebagai substrat dan dengan itu bertanggungjawab untuk sintesis antigen H dalam mucins. Kerana kekhususan Fuc-transferases, residu Fucα1-2 ditambahkan ke N-acetylactosamine terminus sebelum sisa Fucα1-3 atau Fucα1-4 ditambah dalam sintesis penentu Lewis b atau Lewis y (Rajah 4 dan 5). Sebilangan besar orang mempunyai penentu H, tetapi dalam fenotip Bombay dan para-Bombay yang jarang berlaku (Jadual 7) penentu kumpulan darah H tidak ada kerana kecacatan pada α2-Fuc-transferases. 201,202

Aktiviti FUT1 meningkat dalam tumor kolon dan dikaitkan dengan perkembangan tumor. 203 Apabila FUT1 ditransfeksi ke dalam sel REGb karsinoma kolon tikus, sel menjadi lebih agresif dan tumorigenik dalam tikus syngeneik, mungkin disebabkan oleh peningkatan daya tahan terhadap apoptosis. 204 Tikus transgenik FUT1 menunjukkan kolitis dan limfopenia bersama dengan penanda sel T yang menyimpang yang dapat disusun semula dengan pemindahan sumsum tulang dari tikus jenis liar. 205 Ini menunjukkan bahawa FUT1 terlibat secara kritikal dalam pembangunan sel T. Penghapusan gen FUT2 pada tikus (Jadual 6) menghapuskan epitope Fucα1-2Gal dalam mucin gastrousus tetapi tidak menyebabkan sebarang patologi. 206 Dalam tikus bebas kuman, mikrob najis mulut ditunjukkan untuk mendorong ekspresi FUT2 yang tinggi khususnya dalam usus kecil, mencadangkan interaksi hos-mikrob sebagai faktor yang mendorong. 207


Keputusan dan perbincangan

Untuk menjana Tbx1-GFP alel, kami mula-mula menghasilkan plasmid bakteria yang menyatakan protein gabungan Tbx1-GFP kira-kira 75 kilodaltons (kD) (Rajah 1A), sepadan dengan jisim gabungan Tbx1 (

27 kD) (Rajah 1B). The Tbx1-GFP fragmen dimasukkan ke hilir urutan berhenti transkripsional triple polyadenylation (tpA) yang diapit oleh laman LoxP dalam vektor pBigT [13]. Elemen loxP-tpA-loxP-Tbx1-GFP telah diklonkan ke dalam vektor pROSA26PA untuk menyasarkan kepada Rosa26 lokus [13, 14], dan dielektroporasi ke dalam sel stem embrionik tikus (ESC) WW6 (129/SvJ). Kami mengenal pasti 5/56 klon ESC yang disasarkan dengan betul oleh analisis Southern blot (Rajah 1C). Klon 45 dipilih untuk suntikan blastokista pada wanita C57BL6 untuk menghasilkan chimera untuk penularan kuman.

Penjanaan Tbx1-GFP tetikus. (A) Tbx1-GFP telah dimasukkan ke dalam tapak pengklonan berganda (MCS) pBigT hiliran jujukan poliadenilasi tiga kali ganda (tpA) yang diapit oleh tapak LoxP (segi tiga). Subklon tambahan ke dalam plasmid pROSA26PA menghasilkan pembinaan sasaran akhir. Lengan homologi 5 ’dan 3’ menjadi penghubung gabungan dengan endogen Rosa26 lokus. (B) Lisat sel keseluruhan daripada sel COS7 yang ditransfeksi (T) dengan plasmid Tbx1-GFP atau tidak ditransfeksi (UT). Protein peleburan adalah ≈75 kD dan dikesan oleh anti-GFP dan anti-Tbx1 pada Western blot. (C) Southern blot telah digunakan untuk menyaring klon ESC. DNA genom digariskan dengan EcoRV dan dihibridisasi dengan probe radiolabel yang mengikat hulu lengan homologi 5 '. Dua daripada lima klon positif ditunjukkan. Alel yang disasarkan dengan betul ialah 4,071 bp dan alel jenis liar ialah 11,517 kb.

Untuk menguji Tbx1-GFP alel, kami menyeberang Tbx1-GFP flox/flox tikus ke Foxg1-Cre dan Pax2-Cre tikus [15, 16] dan menganalisis fenotip masing-masing. Kedua-dua pemacu Cre sebelumnya telah digunakan untuk menyahaktifkan Tbx1 dengan penggabungan semula tisu loxP khusus [11, 17]. Foxg1-Cre ungkapan bertindih dengan endogen Tbx1 ekspresi dalam tisu seperti radas pharyngeal dan otic vesicle (OV) [11, 15, 17]. Dalam kajian yang dibentangkan di sini, kami menunjukkan bahawa Foxg1-Cre boleh diaktifkan secara ektopik Tbx1-GFP dalam plakod olfaktori, otak depan, dan vesikel optik mengakibatkan kecacatan morfologi tisu-tisu ini semasa pembangunan (Rajah 2A). Di samping itu, menjelang E15.5, Foxg1-CreTbx1-GFP floks / + mutan memaparkan aplasia timik mungkin disebabkan oleh ekspresi berlebihan Tbx1-GFP dalam kantung pharyngeal ke-3, dan pembentukan tidak normal penonjolan hidung. Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan adalah membawa maut perinatal (Rajah 2A).

Pengaktifan Tbx1-GFP oleh Foxg1-Cre dan Pax2-Cre . (A) Foxg1-CreTbx1-GFP floks/+ mutan mempunyai aplasia thymic dan malformasi hidung pada E15.5, dan kecacatan mata dan faring pada E11.5. (B) Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan mati sejurus selepas lahir. Mereka mempunyai kecacatan mikrosefali dan okular. Thymus (T), jantung (H), paru-paru (L), forebrain (FB). (C) Cat pada telinga dalam Pax2-CreTbx1-GFP floks / + dan Foxg1-CreTbx1-GFP floks / + mutan. Saluran endolimfatik (ED) dan crus biasa (CC) diperbesarkan. Saluran separuh bulatan lateral (LC), utricle (U), dan saccule (S) hilang. Koklea (C) dipendekkan kepada pelbagai peringkat. BAC316.23 tikus menunjukkan persamaan dalam kecacatan morfologi telinga dalam. Saluran anterior (AC), saluran posterior (PC). (D) RNA Wholemount in situ hibridisasi pada E9.5 untuk NeuroD, dinyatakan dalam neuroblas ganglia kranial. Imunohistokimia Wholemount mengotorkan ganglia deria kranial dengan anti-Neurofilamen (NF) pada E10.5. Tanda kurung merah menunjukkan plakod penciuman. Otik vesikel dilingkari kuning.

Oleh kerana kecacatan telinga dalam dan jantung adalah dua ciri yang paling menonjol dalam Tbx1 null mutant, kami memutuskan untuk memeriksa struktur tersebut dengan lebih terperinci dalam Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan dan Foxg1-CreTbx1-GFP floks/+ mutan, masing-masing. Foxg1-Cre dan Pax2-Cre keduanya dinyatakan dengan kuat di seluruh OV, dari mana telinga dalam terbentuk. Kedua-dua kerugian atau keuntungan daripada Tbx1 fungsi dalam OV mengganggu morfogenesis telinga dalam [5, 18, 19]. Cat pada telinga dalam Foxg1-CreTbx1-GFP floks / + dan Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan pada E14.5 menunjukkan saluran endolimfatik (ED) dan crus sepunya (CC) yang membesar yang bercantum dengan saluran separuh bulatan anterior dan posterior (SCC) (Rajah 2B). Sric utricle, saccule, dan lateral hilang. Koklea adalah hipoplastik dengan darjah yang berbeza-beza, tetapi diperbesarkan dalam dua keadaan (Rajah 2B). Fenotip ini sangat mirip dengan tikus transgenik BAC316.23 [5] dengan pengecualian bahawa tikus BAC316.23 masih memiliki SCC lateral, dan dalam kebanyakan kes, sakul dan utricle hadir, walaupun salah bentuk (Gambar 2B).

Tbx1 juga dikenali untuk menekan neurogenesis ganglion kranial VIII yang menghidupkan telinga dalam [19]. Di sini kami menunjukkan bahawa dalam Foxg1-CreTbx1-GFP floks/+ mutan, ungkapan Faktor pembezaan neurogenik 1 (NeuroD) hampir dimansuhkan dalam ganglion kranial VIII, dan sangat dilemahkan dalam ganglia kranial V, VII, IX, dan X (Rajah 2C). Imunohistokimia dengan anti-Neurofilamen mengesahkan kehilangan ganglion kranial VIII dan ukuran tidak normal dan unjuran sesat dari ganglia kranial lain di Foxg1-CreTbx1-GFP floks / + mutan (Rajah 2C). Di samping itu, kami mendapati bahawa NeuroD ungkapan hilang sepenuhnya daripada plakod penciuman Foxg1-CreTbx1-GFP floks / + mutan kawasan di mana Foxg1-Cre aktif dan tidak ada Tbx1 ungkapan dalam konteks jenis liar yang menunjukkan bahawa peningkatan fungsi Tbx1 dalam plakod penciuman membawa kepada penindasan ektopik NeuroD. Penemuan ini menunjukkan bahawa Tbx1 boleh bertindak secara langsung atau tidak langsung ke atas faktor neurogenik yang biasa kepada kedua-dua plakod otik dan penciuman.

Pemeriksaan kecacatan SCC di Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan menggunakan catfilling mendedahkan kelewatan dalam pembentukan SCC pada peringkat perkembangan awal (Rajah 3A). Dalam jenis liar, penjelasan plat peleburan dapat dilihat pada E12.25 dan selesai pada E12.5 [20]. Dalam Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan, plat gabungan masih belum bercantum pada E12.25 walaupun ia kelihatan pulih sebahagiannya oleh E14.5 (Rajah 3A). Bahagian histologi di E12.25 mengesahkan bahawa plat peleburan di Pax2-CreTbx1-GFP floks / + mutan kekal melekat pada mesenkim periotik berbanding dengan rakan sampah kawalan (Rajah 3A). Kami memeriksa ekspresi laminin dan netrin-1, protein yang dirembeskan yang berkaitan dengan laminin dan menggalakkan pecahan lamina basal [21, 22]. Kami memerhatikan penurunan paras protein laminin di sepanjang epitelium otik, terutamanya di sepanjang tapak pembentukan SCC sisi bersama-sama dengan penurunan yang sepadan dalam netrin-1 Ekspresi mRNA di sepanjang plat gabungan dalam Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan (Rajah 3B). berkemungkinan begitu Tbx1 boleh bertindak untuk menindas netrin-1, dengan itu memodulasi sifat lekatan sel. Pelengkap keputusan ini berlaku dalam Tbx1 −/− tikus null dalam ungkapan yang mana netrin-1 berkembang dalam mesenkim yang mengelilingi OV (Rajah 3C). Kami tidak memerhatikan berkembang netrin-1 ungkapan dalam OV of Tbx1 −/− tikus null, mungkin disebabkan oleh keparahan fenotip OV dan ketiadaan struktur vestibular.

Mengubah sifat lekatan sel dalam Tbx1 mutan. (A) Catan telinga dalam daripada Pax2-CreTbx1-GFP floks/+ mutan pada peringkat awal perkembangannya secara progresif menunjukkan kelewatan dalam pembentukan SCC. Pada E12.25, plat gabungan (anak panah, FP) kelihatan dalam kawalan, tetapi nampaknya tidak terbentuk dalam mutan. Analisis histologi mengesahkan kecacatan pada plat gabungan (FP, anak panah merah). Dalam kawalan, epithelia vestibular boleh dilihat telah terpisah daripada mesenkim (asteris). Dalam Tbx1-GFP mutan, tiada pemisahan epitelium daripada tisu sekeliling. (B) Imunofluoresensi dengan anti-laminin (merah). Anak panah menunjukkan rentang epithelia plat gabungan. Terdapat laminin yang lebih utuh di Tbx1-GFP mutan. RNA in situ hibridisasi kepada netrin-1 pada bahagian. Netrin-1 ungkapan dikurangkan dalam plat gabungan bagi Tbx1-GFP mutan. Saluran anterior (AC, saluran sisi (LC). (C) Ungkapan dari netrin-1 mRNA pada jenis liar dan Tbx1 −/− tikus null. Netrin-1 ekspresi meningkat pada mesenkim yang mengelilingi telinga dalam tanpa adanya endogen Tbx1.

Untuk menguji sama ada Tbx1-GFP boleh menyelamatkan kecacatan telinga dalam yang berlaku Tbx1 Cre / - embrio null, kami menyeberang Tbx1-GFP flox/flox tikus ke Tbx1 Cre / + tikus [23]. Tbx1 Cre/- tikus telah ditunjukkan untuk menyusun semula Tbx1 −/− fenotip nol [23]. Apabila Cre dinyatakan, sel daripada Tbx1 Cre/+ menyatakan domain adalah positif untuk GFP dengan cara yang mewakili Tbx1 keturunan dalam OV pada embrio (Rajah 4A). Ungkapan Tbx1-GFP di bawah Rosa26 promoter sahaja tidak mencukupi untuk visualisasi langsung GFP semula jadi, oleh itu protein Tbx1-GFP dikesan menggunakan antibodi terhadap GFP. Sejak ungkapan daripada Tbx1-GFP didorong secara berterusan oleh endogen Rosa26 penganjur, kami mengharapkan domain diaktifkan Tbx1-GFP menjadi lebih luas daripada asli Tbx1 ungkapan (Rajah 4A). Imunofluoresensi dengan antiserum anti-GFP menunjukkan bahawa tidak ada protein Tbx1-GFP jika tiada ekspresi Cre dalam OV (Rajah 4A). Tbx1 Cre/+ Tbx1-GFP floks/+ mutan tidak menunjukkan kecacatan morfologi kasar telinga dalam berdasarkan catan (Rajah 4B), mungkin kerana satu alel Tbx1 dikeluarkan oleh knock-in dari Cre. Paintfilling mengesahkan bahawa telinga dalam Tbx1 −/− tikus null kekurangan semua struktur vestibular dan auditori yang boleh dilihat dengan pengecualian yang kelihatan seperti ED yang diperbesarkan (Rajah 4C). Apabila alel tunggal dari Tbx1-GFP diaktifkan dalam a Tbx1 Cre / - latar belakang, terdapat penyelamatan SCC anterior dan posterior dalam semua embrio, dan penyelamatan separa sakulus dan koklea (n=6) (Rajah 4C). Penyelamatan lengkap fenotip nol tidak dijangka dengan pengaktifan konstitutif Tbx1-GFP kerana peraturan sementara dari Tbx1 diperlukan untuk perkembangan telinga dalam yang normal.

Pengaktifan Tbx1-GFP dalam telinga dalam menggunakan Tbx1 Cre/+ . (A) Imunofluoresensi dengan antibodi GFP (merah) dan Tbx1 (merah) pada bahagian melintang E10.5 melalui vesikel otik (OV). Ganglion tengkorak VIII, juga dikenali sebagai ganglion kokleovestibular (CVG) terletak bersebelahan dengan OV. Tiub saraf (NT). (B) Pengaktifan Tbx1-GFP oleh Tbx1 Cre/+ tidak menghasilkan kecacatan morfologi utama telinga dalam, seperti yang divisualisasikan dengan mengisi cat pada E14.5. (C) Pengecatan cat menunjukkan kegagalan morfogenesis telinga dalam pada Tbx1 Cre / - tikus null pada E14.5 berbanding dengan Tbx1-GFP floks/+ kawalan. Pengaktifan alel tunggal Tbx1-GFP di atas Tbx1 Cre / - latar belakang null mampu menyelamatkan sebahagian daripada morfogenesis.

The Tbx1 Cre/+ alel juga digunakan untuk mengaktifkan Tbx1-GFP di laman endogen lain ekspresi Tbx1 seperti mesoderm faring termasuk medan jantung sekunder (Rajah 5A). Analisis histologi bagi Tbx1 Cre/+ Tbx1GFP floks/+ embrio pada E14.5 menunjukkan perkembangan jantung yang normal (Rajah 5B). Genotip tikus di P10 mengesahkan adanya hidup Tbx1 Cre/+ Tbx1GFP floks/+ tikus dalam nisbah Mendelian biasa (Rajah 5B). Sebaliknya, tikus yang mempunyai kedua-duanya Tbx1-GFP alel diaktifkan oleh Tbx1 Cre/+ tidak berdaya maju (Rajah 5B), mendorong kami untuk menilai fenotip jantung dalam Tbx1 Cre/+ Tbx1GFP flox/flox embrio di E14.5. Tbx1 Cre/+ Tbx1GFP flox/flox embrio menunjukkan kecacatan seperti truncus arteriosus berterusan (PTA, 2/5 embrio) dan ventrikel kanan saluran keluar berganda (DORV, 3/5 embrio), semuanya mempunyai kecacatan septum ventrikel (VSD, 5/5 embrio) (Rajah 5C). Ekspresi berlebihan daripada TBX1 sebelum ini telah dikaitkan dengan VSD dalam

10% daripada tikus transgenik BAC316.23 [2]. Kecacatan jantung boleh menyebabkan kematian perinatal Tbx1 Cre/+ Tbx1GFP flox/flox tikus. Kami ingin membandingkan tahap ekspresi protein protein gabungan Tbx1-GFP yang diaktifkan dalam domain Tbx1 berbanding protein Tbx1 endogen. Untuk melakukan ini, kami melakukan suntikan western pada sampel tisu (Rajah 5D) dan memerhatikan bahawa tahap protein Tbx1-GFP yang dinyatakan dari alel tunggal lebih tinggi daripada yang diperhatikan untuk jenis liar endogen Tbx1. Walau bagaimanapun, ini mungkin menggambarkan domain ekspresi Tbx1-GFP yang lebih besar dalam garis keturunan sel yang dilabel oleh Tbx1 Cre/+ .

Kesan dos dari Tbx1-GFP pengaktifan pada perkembangan jantung. (A) Imunofluoresensi dengan antibodi GFP menunjukkan pengaktifan Tbx1-GFP oleh Tbx1 Cre/+ pada E9.5. GFP dikesan dalam vesikel otik posterior (OV), gerbang cawangan ke-1 dan ke-2 (BA1, BA2), dan mesoderm termasuk medan jantung sekunder proksimal ke saluran aliran keluar (OFT). (B) Bahagian melintang histologi pada E14.5 menunjukkan bahawa Tbx1 Cre/+ Tbx1-GFP floks/+ mutan tidak mempunyai kecacatan saluran keluar atau ventrikel. Mereka bertahan dalam nisbah mendelian normal, tidak seperti Tbx1 Cre/+ Tbx1-GFP flox/flox mutan yang tidak dapat dilaksanakan. (C) Pengaktifan kedua-dua alel daripada Tbx1-GFP oleh Tbx1 Cre/+ menyebabkan cacat saluran keluar (truncus arteriosis persisten, PTA) dan kecacatan (ventrikel kanan dua saluran keluar, DORV) kecacatan dengan kecacatan septum ventrikel (VSD). (D) Blot protein barat yang diasingkan dari kawasan faring E9.5 untuk membandingkan tahap ekspresi protein Tbx1-GFP dan Tbx1 endogen. Untuk setiap genotip, kami mengumpulkan 4 embrio (23-24 peringkat somit) dan memuatkan jumlah protein yang sama setiap lorong. Membran yang sama telah disiasat dengan antibodi kepada Tbx1 dan β-aktin. Ukuran jangkaan Tbx1 endogen ialah ≈50 kD sementara protein gabungan Tbx1-GFP ialah ≈75kD. β-aktin dikesan pada ≈40 kD.

Seterusnya, kami ingin menguji sama ada Tbx1-GFP juga dapat menyelamatkan kecacatan jantung yang berlaku di Tbx1 Cre / - embrio (Rajah 6A), yang kesemuanya mempunyai PTA dan VSD (n=3) [12]. Analisis mengenai Tbx1 Cre / - Tbx1GFP floks/+ embrio pada E14.5 menunjukkan penyelamatan lengkap dari kecacatan septasi saluran aliran keluar (n = 8), walaupun 50% masih mengalami ketidaksejajaran saluran aliran keluar yang mengakibatkan DORV (Gambar 6B). VSD diperhatikan dalam semua Tbx1 Cre / - Tbx1GFP floks/+ embrio. Tidak jelas apakah kecacatan ini disebabkan oleh kegagalan menyelamatkannya Tbx1 fenotip nol, atau jika ia disebabkan oleh terlalu banyak ekspresi Tbx1-GFP protein (Rajah 5D), walaupun tahap ekspresi protein seperti yang dikesan oleh western blot tidak memberikan maklumat mengenai tahap aktiviti fungsional protein Tbx1-GFP. Kemungkinan juga kegagalan penyelamatan lengkap adalah disebabkan oleh fakta bahawa Tbx1-GFP dinyatakan secara konstitutif di bawah kawalan Rosa26 penganjur dan oleh itu tidak tertakluk kepada peraturan temporal. Pengaktifan kedua-duanya Tbx1-GFP alel masuk Tbx1 Cre / - Tbx1GFP flox/flox embrio mengakibatkan fenotip jantung yang lebih teruk termasuk PTA pada embrio 5/6 sebagai tambahan kepada VSD (Rajah 6C) kerana lebih jauh Tbx1 ketidakseimbangan dos gen.

Tbx1-GFP sebahagiannya dapat menyelamatkan endogen Tbx1 Cre / - kehilangan-fungsi. Bahagian melintang histologi melalui jantung pada E14.5. (A) Tbx1 Cre / - tikus tidak berfungsi dan mempunyai PTA dan VSD. Tbx1 Cre/+ Tbx1-GFP floks/+ mutan berdaya maju dengan histologi jantung normal. (B) Tbx1 Cre / - Tbx1-GFP floks/+ mutan mempamerkan penyelamatan lengkap pemisahan saluran aliran keluar walaupun separuh daripada embrio mempunyai ventrikel kanan saluran keluar berganda (DORV). (C) Tbx1 Cre / - Tbx1-GFP flox/flox mutan semua mempunyai kecacatan septum ventrikel (VSD), terutamanya dengan truncus arteriosus persisten (PTA) dan salah satu contoh DORV.


Kandungan

Biosintesis glutathione melibatkan dua langkah bergantung pada adenosin trifosfat:

  • pertama, gamma-glutamylcysteine ​​disintesis dari L-glutamat dan sistein. Penukaran ini memerlukan enzim glutamat-cysteine ​​ligase (GCL, glutamat cysteine ​​synthase). Tindak balas ini adalah langkah pembatasan kadar dalam sintesis glutathione. [3]
  • Kedua, glisin ditambah pada terminal C bagi gamma-glutamylcysteine. Pemeluwapan ini dikatalisis oleh glutathione synthetase.

Walaupun semua sel haiwan mampu mensintesis glutathione, sintesis glutathione di hati terbukti penting. Tikus kalah mati GCLC mati dalam sebulan kelahiran kerana ketiadaan sintesis GSH hepatik. [4] [5]

Kaitan gamma amida yang luar biasa dalam glutation melindunginya daripada hidrolisis oleh peptidase. [6]

Edit Kejadian

Glutathione adalah thiol yang paling banyak terdapat dalam sel haiwan, berkisar antara 0,5 hingga 10 mM. Ia terdapat dalam sitosol dan organel. [6]

Manusia mensintesis glutation, tetapi beberapa eukariota tidak, termasuk Fabaceae, Entamoeba, dan Giardia. Satu-satunya archaea yang membuat glutathione adalah halobacteria. Sebilangan bakteria, seperti cyanobacteria dan proteobacteria, dapat biosintesis glutathione. [7] [8]

Glutathione wujud dalam keadaan berkurang (GSH) dan teroksidasi (GSSG). Nisbah glutation terkurang kepada glutation teroksida dalam sel ialah ukuran tegasan oksidatif selular [9] [10] di mana nisbah GSSG-ke-GSH yang meningkat menunjukkan tekanan oksidatif yang lebih besar. Dalam sel dan tisu yang sihat, lebih daripada 90% daripada jumlah kumpulan glutathione dalam bentuk berkurang (GSH), dan selebihnya dalam bentuk disulfida (GSSG). [11]

Dalam keadaan berkurang, kumpulan thiol residu cysteinyl adalah sumber satu setara penurunan. Glutathione disulfide (GSSG) dengan itu dihasilkan. Keadaan teroksida ditukar kepada keadaan terkurang oleh NADPH. [12] Penukaran ini dikatalisis oleh glutathione reductase:

NADPH + GSSG + H2O → 2 GSH + NADP + + OH -

Suntingan Antioksidan

GSH melindungi sel dengan meneutralkan (iaitu, mengurangkan) spesies oksigen reaktif. [13] [6] Penukaran ini digambarkan oleh pengurangan peroksida:

2 GSH + R2O2 → GSSG + 2 ROH (R = H, alkil)

Edit Peraturan

Selain menyahaktifkan radikal dan oksidan reaktif, glutathione turut serta dalam perlindungan thiol dan redoks regulasi protein thiol selular di bawah tekanan oksidatif oleh protein S-glutathionylation, pengubahsuaian thiol pasca-translasi yang diatur redoks. Reaksi umum melibatkan pembentukan disulfida yang tidak simetri dari protein terlindung (RSH) dan GSH: [14]

Glutathione juga digunakan untuk detoksifikasi methylglyoxal dan formaldehyde, metabolit toksik yang dihasilkan di bawah tekanan oksidatif. Reaksi detoksifikasi ini dilakukan oleh sistem glikoksalase. Glyoxalase I (EC 4.4.1.5) memangkinkan penukaran metilglyoxal dan glutathione yang dikurangkan menjadi S-D-lactoyl-glutathione. Glyoxalase II (EC 3.1.2.6) memangkinkan hidrolisis S-D-lactoyl-glutathione ke glutathione dan D-asid laktik.

Ia mengekalkan antioksidan eksogen seperti vitamin C dan E dalam keadaan berkurang (aktif). [15] [16] [17]

Metabolisme Suntingan

Di antara banyak proses metabolik di mana ia mengambil bahagian, glutation diperlukan untuk biosintesis leukotrien dan prostaglandin. Ia berperanan dalam penyimpanan sistein. Glutathione meningkatkan fungsi sitrulin sebagai sebahagian daripada kitaran oksida nitrat. [18] Ia adalah kofaktor dan bertindak ke atas glutation peroksidase. [19]

Suntingan Konjugasi

Glutathione memudahkan metabolisme xenobiotik. Enzim glutathione S-transferase memangkin konjugasi dengan xenobiotik lipofilik, memudahkan perkumuhan mereka atau metabolisme lebih lanjut. [20] Proses konjugasi digambarkan oleh metabolisme N-asetil-hlm-benzoquinone imine (NAPQI). NAPQI adalah metabolit reaktif yang dibentuk oleh tindakan sitokrom P450 pada paracetamol (acetaminophen). Glutathione konjugasi kepada NAPQI, dan ensembel yang terhasil dikumuhkan.

Potensi neurotransmiter Edit

Glutathione, bersama dengan glutathione teroksidasi (GSSG) dan S-nitrosoglutathione (GSNO), mengikat ke laman web pengiktirafan glutamat dari reseptor NMDA dan AMPA (melalui bahagian γ-glutamil mereka). GSH dan GSSG mungkin merupakan neuromodulator. [21] [22] [23] Pada kepekatan milimolar, GSH dan GSSG juga dapat memodulasi keadaan redoks kompleks reseptor NMDA. [22] Glutathione mengikat dan mengaktifkan reseptor ionotropik, berpotensi menjadikannya neurotransmitter. [24]

GSH mengaktifkan reseptor purinergik P2X7 dari Müller glia, mendorong isyarat sementara kalsium akut dan pelepasan GABA dari kedua-dua neuron retina dan sel glial. [25] [26]

Dalam tumbuhan Edit

Pada tanaman, glutathione terlibat dalam pengurusan tekanan. Ia adalah komponen kitaran glutathione-askorbat, sistem yang mengurangkan hidrogen peroksida beracun. [27] Ia adalah prekursor phytochelatins, oligomer glutation yang mengelat logam berat seperti kadmium. [28] Glutathione diperlukan untuk pertahanan yang cekap terhadap patogen tumbuhan seperti Pseudomonas syringae dan Phytophthora brassicae. [29] Adenylyl-sulfate reductase, enzim jalur asimilasi sulfur, menggunakan glutathione sebagai penderma elektron. Enzim lain yang menggunakan glutation sebagai substrat ialah glutaredoksin. Oksidoriduktase kecil ini terlibat dalam pengembangan bunga, asid salisilik, dan isyarat pertahanan tanaman. [30]

Ketersediaan bio sistematik glutathione yang dimakan secara oral adalah lemah kerana tripeptida adalah substrat protease (peptidases) saluran makanan, dan kerana ketiadaan spesifik pembawa glutation pada tahap membran sel. [31] [32] Dalam kajian lain, penyelidik melaporkan suplemen glutation jangka panjang menawarkan perlindungan daripada kerosakan oksidatif. Dalam kajian ini suplemen GSH oral 500 mg bukan sahaja meningkatkan GSH eritrosit tetapi juga menurunkan 8-OHdG secara signifikan dalam masa tiga bulan pada individu diabetes tua (berumur di atas 55 tahun) [33]

Oleh kerana suplemen langsung glutathione tidak berjaya, bekalan bahan pemakanan mentah yang digunakan untuk menghasilkan GSH, seperti sistein dan glisin, mungkin lebih berkesan untuk meningkatkan kadar glutathione. Antioksidan lain seperti asid askorbik (vitamin C) juga boleh berfungsi secara sinergis dengan glutathione, mencegah penipisan kedua-duanya. Kitaran glutathione-askorbat, yang berfungsi untuk menyahtoksik hidrogen peroksida (H2O2, adalah salah satu contoh fenomena ini yang sangat spesifik.

Suplemen oral dengan gamma-glutamylcysteine ​​telah terbukti dapat meningkatkan tahap glutathione selular dengan berkesan. [34]

Selain itu, sebatian seperti N-acetylcysteine ​​[35] (NAC) dan asid alfa lipoik [36] (ALA, tidak boleh dikelirukan dengan asid alfa-linolenik yang tidak berkaitan) kedua-duanya mampu membantu menjana semula tahap glutation. NAC khususnya biasanya digunakan untuk merawat lebihan dos acetaminophen, sejenis keracunan yang boleh membawa maut yang sebahagiannya berbahaya akibat pengurangan tahap glutation yang teruk. Ia adalah pendahulu sistein.

Calcitriol (1,25-dihydroxyvitamin D3, metabolit aktif vitamin D3, selepas disintesis daripada calcifediol dalam buah pinggang, meningkatkan tahap glutation dalam otak dan nampaknya menjadi pemangkin untuk pengeluaran glutation. [37] Kira-kira sepuluh hari diperlukan untuk tubuh memproses vitamin D3 menjadi calcitriol. [38]

S-adenosylmethionine (SAMe), kosubstrat yang terlibat dalam pemindahan kumpulan metil, juga telah ditunjukkan untuk meningkatkan kandungan glutation selular pada orang yang mengalami kekurangan glutation yang berkaitan dengan penyakit. [39] [40] [41]

Glutathione rendah biasanya diperhatikan dalam pembaziran dan keseimbangan nitrogen negatif, seperti yang dilihat dalam kanser, HIV/AIDS, sepsis, trauma, melecur, dan latihan berlebihan sukan. Tahap rendah juga diperhatikan dalam tempoh kelaparan. Kesan ini dihipotesiskan dipengaruhi oleh aktiviti glikolitik yang lebih tinggi yang berkaitan dengan cachexia, yang disebabkan oleh penurunan tahap fosforilasi oksidatif. [42] [43]

Reagen Ellman dan monobromobimane Edit

Glutathione berkurangan boleh divisualisasikan menggunakan reagen Ellman atau derivatif bimane seperti monobromobimane. Kaedah monobromobimane lebih sensitif. Dalam prosedur ini, sel disenyawakan dan thiol diekstraksi menggunakan penyangga HCl. Tiol kemudiannya dikurangkan dengan dithiothreitol dan dilabelkan oleh monobromobimane. Monobromobimane menjadi pendarfluor selepas mengikat GSH. Thiol kemudian dipisahkan dengan HPLC dan pendarfluor dihitung dengan pengesan pendarfluor.

Sunting Monochlorobimane

Dengan menggunakan monoklorobimana, pengukuran dilakukan dengan mikroskopi imbasan laser confocal setelah penggunaan pewarna ke sel hidup. [44] Proses kuantifikasi ini bergantung pada pengukuran kadar perubahan pendarfluor dan terhad kepada sel tumbuhan.

CMFDA juga salah digunakan sebagai probe glutathione. Tidak seperti monoklorobimana, yang pendarfluornya meningkat apabila bertindak balas dengan glutathione, peningkatan pendarfluor CMFDA disebabkan oleh hidrolisis kumpulan asetat di dalam sel. Walaupun CMFDA mungkin bertindak balas dengan glutation dalam sel, peningkatan pendarfluor tidak mencerminkan tindak balas. Oleh itu, kajian menggunakan CMFDA sebagai probe glutathione harus dikaji semula dan ditafsir semula. [45] [46]

ThiolQuant Green Edit

Batasan utama probe berdasarkan bimane ini dan banyak prob lain yang dilaporkan adalah bahawa probe ini berdasarkan reaksi kimia yang tidak dapat dipulihkan dengan glutathione, yang menjadikan probe ini tidak dapat memantau dinamika glutathione masa nyata. Baru-baru ini, probe pendarfluor berasaskan tindak balas bolehbalik pertama-ThiolQuant Green (TQG) -untuk glutathione dilaporkan. [47] ThiolQuant Green bukan sahaja boleh melakukan pengukuran resolusi tinggi tahap glutation dalam sel tunggal menggunakan mikroskop confocal, tetapi juga digunakan dalam sitometri aliran untuk melakukan pengukuran pukal.

Edit RealThiol

Probe RealThiol (RT) adalah probe GSH berasaskan reaksi boleh balik generasi kedua. Beberapa ciri utama RealThiol: 1) ia mempunyai kinetik tindak balas ke hadapan dan ke belakang yang lebih pantas berbanding ThiolQuant Green, yang membolehkan pemantauan masa nyata dinamik GSH dalam sel hidup 2) hanya mikromolar ke sub-mikromolar RealThiol diperlukan untuk pewarnaan dalam eksperimen berasaskan sel, yang mendorong gangguan minimum kepada tahap GSH dalam sel 3) fluorophore kumarin hasil kuantum tinggi telah dilaksanakan supaya bunyi latar belakang dapat diminimumkan dan 4) pemalar keseimbangan tindak balas antara RealThiol dan GSH telah diperhalusi untuk bertindak balas terhadap kepekatan GSH yang relevan secara fisiologi. [48] ​​RealThiol dapat digunakan untuk melakukan pengukuran kadar glutathione dalam sel tunggal menggunakan mikroskop confocal resolusi tinggi, serta diterapkan dalam sitometri aliran untuk melakukan pengukuran pukal dengan cara throughput yang tinggi.

Probe RT yang disasarkan organelle juga telah dikembangkan. Versi sasaran mitokondria, MitoRT, telah dilaporkan dan ditunjukkan dalam memantau dinamik glutation mitokondria kedua-duanya pada mikroskop confocoal dan analisis berasaskan FACS. [49]

Probe protein berasaskan glutathione Edit

Pendekatan lain, yang memungkinkan pengukuran potensi redoks glutathione pada resolusi spasial dan temporal tinggi dalam sel hidup, adalah berdasarkan pengimejan redoks menggunakan protein pendarfluor hijau sensitif redoks (roGFP) [50] atau protein pendarfluor kuning sensitif redoks (rxYFP ). [51] Oleh kerana kepekatan fisiologinya yang sangat rendah, GSSG sukar untuk diukur dengan tepat. Kepekatan GSSG berkisar antara 10 hingga 50 μM dalam semua tisu pepejal, dan dari 2 hingga 5 μM dalam darah (13-33 nmol per gram Hb). Nisbah GSH-ke-GSSG ekstrak keseluruhan sel dianggarkan dari 100 hingga 700. [52] Nisbah tersebut mewakili campuran dari kumpulan glutathione dari keadaan redoks yang berbeza dari petak subselular yang berbeza (contohnya lebih banyak teroksidasi di ER, lebih banyak dikurangkan dalam mitokondria matriks), namun. Nisbah GSH-ke-GSSG dalam vivo boleh diukur dengan ketepatan subselular menggunakan penderia redoks berasaskan protein pendarfluor, yang telah mendedahkan nisbah daripada 50,000 hingga 500,000 dalam sitosol, yang membayangkan bahawa kepekatan GSSG dikekalkan dalam julat pM. [53]

Ulasan komprehensif mengenai kepentingan glutathione dalam penyakit manusia telah diterbitkan secara berkala dalam jurnal perubatan yang dikaji oleh rakan sebaya. [54] [55] [56] [57] [58] [59] [60] [61] [62] [63] Hubungan sebab dan akibat yang tidak dapat dipertikaikan antara metabolisme GSH dan penyakit, seperti diabetes, fibrosis kistik, barah, penyakit neurodegeneratif, HIV dan penuaan telah ditunjukkan. Pelbagai penjelasan tentang mengapa pengurangan GSH dikaitkan dengan tekanan oksidatif dalam keadaan penyakit ini telah dicadangkan.

Penyuntingan Barah

Setelah tumor telah dibentuk, kadar glutathione yang tinggi dapat bertindak melindungi sel-sel barah dengan memberikan ketahanan terhadap ubat-ubatan kemoterapi. [64] Ubat mustard antineoplastik canfosfamide dimodelkan pada struktur glutathione.

Sunting fibrosis sista

Beberapa kajian telah diselesaikan mengenai keberkesanan memperkenalkan glutathione yang disedut kepada penghidap cystic fibrosis dengan hasil yang bercampur-campur. [65] [66]

Penyakit Alzheimer

Walaupun plak beta amiloid selular (Aβ) tambahan, kusut neurofibrillary (NFT), keradangan dalam bentuk astrosit dan mikroglia reaktif, dan kehilangan neuron adalah ciri patologi konsisten penyakit Alzheimer (AD), hubungan mekanistik antara faktor-faktor ini masih belum berlaku. diperjelaskan. Walaupun sebahagian besar penyelidikan masa lalu telah menumpukan pada fibrillar Aβ, spesies Aβ oligomerik larut kini dianggap sebagai kepentingan patologi utama pada AD. Penyelarasan GSH mungkin melindungi terhadap kesan oksidatif dan neurotoksik Aβ oligomerik. [ petikan perubatan diperlukan ]

Pengurangan bentuk tertutup GSH dalam hippocampus mungkin merupakan biomarker diagnostik awal yang berpotensi untuk AD. [67] [68]

Edit Pembuatan wain

Kandungan glutathione dalam must, bentuk anggur mentah pertama, menentukan kesan browning, atau karamel, semasa penghasilan wain putih dengan memerangkap quinones asid caffeoyltartaric yang dihasilkan oleh pengoksidaan enzim sebagai produk reaksi anggur. [69] Kepekatannya dalam anggur dapat ditentukan dengan spektrometri massa UPLC-MRM. [70]

Edit Kosmetik

Glutathione adalah agen yang paling biasa diambil melalui mulut dalam usaha untuk memutihkan kulit. [71] Ia juga boleh digunakan sebagai krim. [71] Sama ada ia benar-benar berfungsi atau tidak jelas pada tahun 2019. [72] Oleh kerana kesan sampingan yang mungkin disebabkan oleh penggunaan intravena, pemerintah Filipina mengesyorkan agar tidak digunakan. [73]


Bahagian 2: Neuropatologi Sklerosis Berbilang

00: 00: 12.17 Halo semua, selamat datang ke persembahan iBiology saya.
00:00:16.14 Ini ialah bahagian 2 siri sklerosis berganda dan remyelin.
00:00:20.26 Pembentangan bahagian 1 diberikan oleh profesor Mikael Simons dari
00:00:26.23 Universiti Teknikal Munich. Saya Christine Stadelmann dari
00: 00: 31.13 Institut Neuropatologi di Gottingen, dan saya sekarang mengikuti perkara berikut
00: 00: 35.04 pembentangan akan membincangkan mengenai patologi pelbagai sklerosis dan
00:00:39.11 juga semua prospek yang kita lihat untuk remyelination.
00: 00: 43.06 MS adalah penyakit yang menyerang kira-kira 2.5 juta orang
00: 00: 52.10 di seluruh dunia. Ia adalah penyakit yang biasanya bermula pada masa dewasa muda.
00: 00: 57.16 Dan itu adalah patogenesis kompleks. Kini ia dipercayai
00:01:03.01 bahawa terdapat kecenderungan genetik untuk penyakit ini, tetapi itu
00:01:06.16 ia dipuji oleh faktor persekitaran. Faktor-faktor ini
00: 01: 11.02 bersama-sama membawa kepada tindak balas imun yang menyimpang atau merosakkan
00: 01: 14.19 yang mensasarkan sistem saraf pusat. Berkenaan dengan
00:01:19.02 kecenderungan genetik, kita tahu sekarang bahawa polimorfisme masuk
00: 01: 21.28 gen pengatur imun adalah relevan untuk kecenderungan
00: 01: 25.24 untuk mendapat penyakit. Sebaliknya, faktor persekitaran
00: 01: 29.25 seperti EBV, vitamin D, dan merokok mempengaruhi risiko menarik
00:01:37.28 -- atau dijangkiti penyakit. Berkenaan dengan kursus penyakit, MS
00:01:44.05 agak istimewa. Oleh itu pada dasarnya ia berubah wajah. Pada permulaan,
00: 01: 50.29 MS biasanya muncul sebagai penyakit rematik yang kambuh dengan hampir
00: 01: 55.19 pemulihan penuh antara kambuh. Namun, selepas beberapa tahun
00: 02: 00.26 penyakit, banyak pesakit, sekitar 70%, berubah menjadi progresif sekunder
00: 02: 07.10 fasa penyakit di mana pengumpulan keupayaan ini pada dasarnya berlaku
00:02:12.02 tanpa relaps bertindih. Jadi pada dasarnya, tanpa nampaknya
00:02:16.28 pengaktifan imun periferi. Sebaliknya, jumlah otak berubah
00:02:24.12 berlaku pada asasnya sejak awal lagi. Dan itu dengan pengurangan
00: 02: 28.29 di otak, dan penurunannya mungkin menjadi masalah sebenar berkaitan dengan
00: 02: 34.08 perkembangan fasa penyakit progresif sekunder.
00:02:37.01 Bagaimana pula dengan patologi sklerosis berbilang? Inilah yang anda lihat
00: 02: 42.08 adalah bahagian otak tetap dengan periventrikular yang sangat menonjol
00:02:48.12 lesi otak yang anda lihat di sini. Dan kawasan kelabu ini
00:02:52.06 sangat menonjol, sangat jelas, anda melihatnya di kedua-dua belah pihak
00:02:55.29 di sini. Pada kedua-dua hemisfera otak. Dan ini mewakili
00: 02: 59.10 lesi sklerosis berganda sepenuhnya. Selain dari ini
00:03:04.14 kawasan periventrikular, tapak predileksi lain ialah saraf optik,
00: 03: 08.17 kawasan kortikal subpial yang akan saya sampaikan sedikit kemudian, iaitu tulang belakang
00: 03: 13.02 tali, batang otak, dan juga otak kecil.
00:03:16.19 Apakah kini ciri utama patologi MS?
00: 03: 20.10 Satu tangan, jelas lesi fokus demelin
00:03:24.07 yang akan kita bincangkan secara mendalam pada minit berikutnya, tetapi juga
00:03:29.29 patologi otak meresap nampaknya semakin penting.
00:03:34.08 Terutama dengan peningkatan tempoh penyakit. Dan ini termasuk
00: 03: 39.13 penyusupan sel T meningeal dan parenchymal, meresap
00: 03: 42.10 pengaktifan mikroglia, kerosakan dan kerugian neuroaxonal, dan juga
00:03:47.02 kemudian atrofi otak yang mungkin punca semua itu.
00: 03: 52.26 Oleh itu, dalam pembentangan ini, saya akan memfokus pada lesi fokus
00: 03: 59.08 patologi yang diperhatikan di MS. Ini adalah kronik biasa
00: 04: 05.20 luka lesi, anda melihat myelin berwarna biru, anda melihatnya
00:04:10.13 luka demielin pada bunga mawar, anda juga melihat bahawa luka ini adalah
00:04:15.17 periventrikular disetempatkan, jadi sangat ciri untuk yang mantap
00:04:19.04 MS luka. Anda melihat tepi lesi yang sangat tajam. Anda lihat pada dasarnya
00: 04: 24.16 bahawa lesi adalah hiposelular di pusat lesi, dan anda tidak
00:04:28.24 lihat pengumpulan sel di tepi lesi. Jadi ini
00: 04: 34.08 nampaknya lebih kurang parut dengan sedikit atau tidak
00: 04: 39.10 aktiviti penyakit yang berterusan. Berbeza dengan apa yang saya tunjukkan sebelum ini,
00: 04: 46.06 adalah lesi aktif atau disebut "membakar" kronik ini. Ada sahaja
00:04:50.13 dengan hampir kosong dalam slaid ini di sini, anda melihat bahawa terdapat
00:04:55.20 pertambahan sel di sini di sempadan lesi di sekeliling ini
00: 04: 59.28 kawasan luka di sini. Dan jika anda melakukan imunohistokimia,
00: 05: 04.18 dan lihat slaid dengan lebih terperinci, anda melihat bahawa ada
00:05:07.13 pengumpulan pada asasnya sel mieloid. Daripada makrofag dan
00: 05: 11.00 mikroglia diaktifkan. Dan apa yang juga sangat penting, nuklear
00: 05: 14.17 di pusat lesi, hampir tidak ada pengaktifan mikroglia. Juga tidak
00:05:18.23 pengambilan fagosit ditemui. Pengaktifan mikroglia ini, fagosit
00: 05: 26.06 pengambilan, pengaktifan sel myeloid, sangat disertai oleh
00: 05: 30.20 kerosakan aksonal akut. Dan gambar yang anda lihat di sini betul
00:05:35.10 dari sempadan lesi ini. Jadi dari sempadan luka yang membara ini,
00: 05: 40.22 dengan beberapa aktiviti demyelinasi yang tinggal.
00:05:45.02 Dan apa yang anda lihat sebenarnya dalam imunohistokimia APP ini
00: 05: 48.10 adalah gangguan pengangkutan paksi, jadi anda melihat terkumpul
00:05:53.18 APP di sini dalam akson. Dan apa yang kita tahu dari kajian haiwan
00:05:57.06 dan kajian dalam trauma otak, bahawa protein APP ini kekal di sana
00: 06: 02.29 sekitar tiga minggu. Jadi pada dasarnya, ini bermaksud bahawa akson ini
00: 06: 07.13 telah rosak atau demelin dalam tiga minggu terakhir.
00:06:10.24 Atau ini bermakna mereka mengalami gangguan fungsi secara berterusan.
00: 06: 15.17 Dan semua ini tentunya sangat relevan untuk pemahaman kita mengenai
00: 06: 19.00 penyakit progresif. Dan ini hanyalah ilustrasi skematik
00: 06: 24.05 dari aktiviti lesi yang membara ini. Pada asasnya, itu adalah ciri khas
00:06:29.07 benar-benar daripada multiple sclerosis dan merupakan jenis lesi yang paling biasa
00:06:33.02 diperhatikan pada pesakit dengan penyakit progresif. Bagaimana dengan
00: 06: 38.23 luka awal? Saya ingin mengatakan bahawa seseorang jarang mempunyai peluang
00:06:42.11 untuk melihat lesi awal kerana MS biasa biasa
00: 06: 46.11 pesakit tentu tidak menjalani biopsi otak. Jadi anda
00: 06: 50.02 benar-benar melihat bahawa hanya dalam keadaan tertentu, terutamanya ketika
00:06:54.02 persembahan klinikal atau persembahan MRI tidak
00: 06: 58.01 jelas sepenuhnya. Apa yang anda lihat di sini adalah pewarnaan yang sama seperti sebelumnya,
00:07:04.08 dengan histokimia PAS, dan sekali lagi myelin berwarna biru. Dan sekali lagi
00: 07: 07.19 lesi meningkat. Anda melihat hypercellularity di sana, anda melihat semua ini
00: 07: 13.28 hypercellularity malah meningkat di pinggir lesi. Dan jika awak
00:07:19.00 lakukan beberapa imunohistokimia dan anda melihat makrofaj
00: 07: 21.28 dan semua mikroglia yang diaktifkan, anda sekali lagi melihat dengan jelas
00: 07: 26.18 tepi lesi di sini. Sekali lagi, bercakap untuk evolusi lesi emparan
00: 07: 34.18 pada asasnya. Tetapi sudah tentu di sini dalam lesi yang agak awal ini, anda lihat
00:07:40.11 juga bahawa lesi dipenuhi dengan makrofaj di pusat lesi.
00:07:43.18 Berkenaan dengan astrosit, anda mungkin melihat permulaan astrosit
00: 07: 51.04 reaksi, astrogliosis reaktif pada lesi itu sendiri, dan juga pada
00: 07: 55.08 tepi lesi. Dan ini sangat penting berkaitan dengan haiwan
00:07:59.18 lesi model yang saya akan tunjukkan kepada anda sebentar lagi. Dengan salam
00: 08: 02.28 hingga penyusupan sel T, ini mungkin sangat jarang berlaku pada luka awal ini
00: 08: 08.22 yang baru sahaja saya tunjukkan kepada anda. Jika anda lihat di sini, ini adalah CD8-positif
00: 08: 13.23 sel yang kita lihat di sini. Jika anda melihat pada CD3, anda mungkin mempunyai
00:08:17.04 kira-kira dua kali ganda nombor yang saya tunjukkan di sini. Jadi agak terhad.
00: 08: 21.11 Tetapi semakin banyak dengan evolusi lesi. Berkenaan dengan
00: 08: 27.12 tujuan akhir kami dalam pemulihan lesi, tentu saja penilaian mengenai
00: 08: 31.23 oligodendrocytes matang, prekursor oligodendrocyte, sangat relevan
00:08:35.26 dalam lesi. Dan ini contohnya di sini, imunohistokimia pewarnaan
00: 08: 39.25 untuk NogoA, untuk oligodendrocytes matang. Dan seperti yang kelihatan, matang
00: 08: 45.24 oligodendrocytes nampaknya tidak banyak terganggu oleh ini
00:08:51.25 pembentukan lesi. Anda melihat sedikit pengurangan di sini dalam aktif
00:08:55.19 tepi luka, tetapi tidak begitu. Nampaknya protein itu
00: 08: 59.16 diatur dalam lesi, berbanding dengan perkara putih yang jelas.
00: 09: 04.04 Apa yang sangat kami ingin lakukan dalam penyelidikan kami, tetapi juga dalam klinikal
00:09:11.02 amalan, adalah untuk benar-benar peringkat lesi demielin kami berkaitan
00: 09: 15.26 untuk aktiviti demyelinated. Untuk dapat membandingkan lesi antara pesakit
00:09:21.02 dan juga lesi antara penyakit yang berbeza. Untuk membandingkan secara asasnya
00:09:25.24 tahap pembentukan lesi yang sama. Apa yang kita gunakan untuk tujuan tersebut
00:09:29.29 dalam satu pihak, kehadiran produk degradasi mielin dalam
00: 09: 33.00 makrofaj. Kami menggunakan protein myelin utama dan kecil dan dengan
00: 09: 37.06 konsep yang diperlukan protein myelin utama lebih lama
00:09:40.24 dihadam. Jadi jika anda menjumpai protein myelin yang masih kecil, seperti MOG,
00: 09: 44.29 cAMP, MAG, di makrofag. Ini pada dasarnya menunjukkan
00: 09: 48.01 luka yang lebih baru. Apa yang juga terbukti sangat, sangat berguna
00:09:52.25 ialah beberapa penanda pengaktifan makrofaj, seperti MRP14.
00:09:57.08 Itu benar-benar menyerlahkan monosit yang menyerang baru-baru ini daripada darah
Aliran 00: 10: 02.20. Oleh itu, ia merupakan penanda yang sangat berguna untuk penentuan usia lesi
00: 10: 07.04 dalam persekitaran kami. Bilakah lesi yang mana berlaku? Bilakah mereka
00: 10: 14.13 paling menonjol? Dan di sana saya fikir apa yang sangat penting untuk anda ialah
00: 10: 19.24 bahawa di satu pihak, luka hijau yang digambarkan di sini,
00:10:22.07 ini adalah luka-luka penyahmielinan yang aktif. Mereka berlaku dalam
00:10:25.29 penyakit monophasic, ia berlaku dalam penyakit remitting berulang,
00: 10: 29.23 mereka juga berlaku dalam bentuk penyakit yang lebih kronik, seperti
00: 10: 35.10 sebagai MS progresif sekunder dan progresif primer.
00: 10: 38.02 Tetapi pada peringkat lesi ini, ini memang kronik
00:10:42.22 membara atau lesi aktif kronik yang mendominasi
00: 10: 45.25 tentu juga luka yang tidak aktif, yang disebut luka bakar. Dan
00: 10: 49.19 juga sebahagiannya, plak bayangan. Dan bayang-bayang plak adalah
00: 10: 52.12 di sini benar-benar ditunjukkan dalam bunga mawar. Jadi hanya untuk perbandingan, rancangan saya di sini adalah
00:11:03.26 untuk menunjukkan kepada anda sedikit sekurang-kurangnya patologi lesi NMO.
00:11:08.05 Untuk membuat perbandingan dengan MS dan melihat myelin
00: 11: 12.13 patologi yang mungkin berbeza dalam keadaan klinikal ini. Jadi ini
00: 11: 18.13 adalah bahagian saraf tunjang dari pesakit neuromielitis optica.
00:11:23.04 Dan hanya dengan melihat di sini pada LFB/PAS dan juga makrofaj
00: 11: 27.13 imunohistokimia, anda melihat luka besar di bahagian punggung
00: 11: 31.19 funiculus dan juga kawasan saraf tunjang ventrolateral di sini.
00:11:36.07 Dan hanya dengan melihat pewarnaan makrofaj, anda mungkin
00: 11: 40.06 mengatakan bahawa dari ketumpatan yang anda lihat, bahawa ventrolateral
00:11:44.02 lesi adalah lebih muda, lebih baru. Yang penting,
00:11:49.07 pada tahun 2004, Vanda Lennon telah menunjukkan bahawa NMO,
00: 11: 53.25 neuromielitis optica, bukan penyakit spektrum seperti sklerosis berganda
00: 11: 58.26 atau varian sklerosis berganda, tetapi benar-benar penyakit yang sama sekali berbeza
00: 12: 04.01 entiti. Dan bahawa dia menunjukkan antibodi anti-AQP4 itu
00: 12: 08.10 betul-betul tanda penyakit ini. Neuromielitis
00:12:13.28 optik pada asasnya adalah penyakit yang dicirikan oleh tulang belakang dan optik
00: 12: 17.25 penglibatan saraf. Dan sudah tentu, tidak semua pesakit dengan ini
00:12:20.29 tanda dan gejala klinikal mempunyai antibodi anti-AQP4.
00:12:24.22 Tetapi mereka yang mempunyai, ditetapkan kemudian autoimun anti-AQP4
00: 12: 31.18 dan jika anda melakukan ujian imunofluoresensi tidak langsung di
00: 12: 35.19 pesakit ini. Contohnya pada bahagian cerebellar mereka, anda akan melakukannya
00:12:39.24 lihat betul-betul apa yang saya tunjukkan di sini di sebelah sini. Itulah, anda akan
00: 12: 43.25 melihat penerangan permukaan pial yang jelas dan sangat bagus dan halus
00:12:49.28 di satu pihak, dan kapilari, seperti yang dilihat di sini di sebelah kanan ini
00: 12: 55.24 bahagian otak. Menunjukkan bahawa dengan antibodi anti-APQ4, anda pada asasnya
00:13:01.14 labelkan pemproses makanan astrocyte yang berada dalam kapilari otak.
00:13:07.28 Sekarang mengetahui bahawa pada asasnya tindak balas imun anti-astrocyte adalah
00: 13: 19.11 penyebab NMO dan melihat morfologi lesi yang anda lihat
00: 13: 26.07 di otak, anda mungkin mengharapkan yang sama sekali berbeza
00: 13: 30.08 jenis patologi. Walau bagaimanapun, melihat lesi di sini pada LFB
00: 13: 34.06 Histokimia PAS, anda mungkin benar-benar salah diagnosis
00: 13: 39.06 dan mendiagnosis lesi MS. Jika anda tidak melihat dengan teliti.
00: 13: 43.18 Akan tetapi, melihat sedikit lebih mendalam dan melihat astrosit, misalnya,
00:13:48.01 menggunakan imunohistokimia GFAP. Anda lihat bahawa astrosit tidak
00:13:51.28 biasanya musnah di pusat lesi, ke arah kanan bawah.
00: 13: 56.07 Mereka dipelihara di sempadan kiri atas di sini, di mana
00: 14: 02.18 bahan putih peri plak terletak. Melangkah lebih jauh dan benar-benar
00:14:08.02 pewarnaan untuk AQP4 itu sendiri, anda melihat bahawa imunoreaktiviti ini adalah sekata
00: 14: 12.07 semakin menurun, berbanding protein struktur GFAP.
00: 14: 16.23 Sekali lagi, sebagai bukti bahawa antibodi AQP4 di sini berperanan dalam
00:14:23.20 penyakit. Sekiranya anda melihat oligodendrocytes atau matang dan
00:14:28.12 sel prekursor oligodendrocyte dalam lesi menggunakan NogoA dan
00:14:33.00 Olig2 sebagai penanda, seperti yang kami lakukan di sini. Anda melihat bahawa oligodendrocytes
00: 14: 36.20 sebahagian besarnya tidak terdapat pada luka akut ini, musnah sepenuhnya
00: 14: 41.22 kerana proses pembentukan lesi awal positif anti-APQ4
00: 14: 46.24 gangguan spektrum neuromielitis optica. Kemudian melihat myelin
00: 14: 53.23 patologi protein sedikit lebih dekat, anda melihat bahawa myelin utama
00: 15: 00.02 protein, seperti MBP dan juga PAP, sebahagian besarnya diawetkan
00:15:04.11 dalam lesi awal ini. Dan anda tidak akan mudah didiagnosis
00:15:08.29 melalui penyahmielinan di sini. Sedangkan jika anda melihat MAG atau CMP,
00:15:14.08 anda akan mendapati jumlah penurunan atau kehilangan protein mielin ini dalam lesi.
00: 15: 19.16 Oleh itu, proses ini menunjukkan proses demyelinasi patologi yang berbeza
00: 15: 27.22 berlaku. Dan apa yang dapat disimpulkan dari itu, bahawa sekurang-kurangnya ada
00:15:32.17 dua mekanisme prinsip demielinasi. Di satu pihak,
00: 15: 36.00 mekanisme di mana oligodendrocyte menderita primer
00:15:40.20 kerosakan daripada kematian sel oligodendroglial. Dan sarung myelin ketika itu
00:15:44.22 merosot secara kedua. Dan sebaliknya, penyakit
00:15:49.04 tetapan keadaan patologi, sama ada primer
00: 15: 52.23 sasaran tindak balas imun adalah sarung myelin. Dan
00: 15: 57.20 sama ada kemudian dikeluarkan oleh makrofag bersamaan dengan
00: 16: 02.14 oligodendrocyte. Atau malah oligodendrocytes kelihatan terpelihara
00: 16: 07.02 hingga tahap tertentu. Pada bahagian seterusnya, saya sangat suka
00:16:12.20 untuk kembali sedikit kepada apa yang Mika telah bincangkan,
00: 16: 18.10 iaitu perkembangan penyakit pada sklerosis berganda.
00:16:21.07 Dan pastinya, ini adalah salah satu ciri ciri
00:16:24.20 penyakit. Dan sekali lagi, seperti yang saya katakan tadi, sangat istimewa dan setakat ini,
00: 16: 29.22 juga teka-teki yang tidak dapat diselesaikan. Dan selama beberapa dekad sekarang, ahli neuropatologi
00: 16: 33.29 telah berusaha untuk membuktikan hubungan penyakit progresif
00:16:38.07 dalam bahan mereka. Apa yang sangat menonjol pada pesakit MS peringkat akhir adalah
00: 16: 44.22 pastinya patologi kortikal. Dan di sana terutamanya, kortikal subpial
00: 16: 48.18 demyelination, seperti yang digambarkan di sini dengan anak panah. Sangat berciri
00:16:54.05 untuk penyakit kronik, sangat meluas pada pesakit kronik. Dan
00:16:57.23 sudah tentu, seperti yang anda ketahui, tidak dikesan oleh pengimejan MR.
00: 17: 02.17 Jadi, betul-betul, melarikan diri dari korelasi patologi klinikal kita
00:17:07.29 biasanya. Yang penting, bagaimanapun, yang harus disebutkan ialah
00: 17: 13.16 demyelinasi kortikal bukan sahaja merupakan ciri tahap akhir
00:17:17.07 penyakit, tetapi juga berlaku pada awal penyakit dan mungkin juga
00: 17: 21.12 secara langsung hadir pada pertarungan penyakit pertama.
00:17:28.11 Apa yang boleh menyumbang kepada kepentingan penyakit kronik adalah
00:17:35.25 walau bagaimanapun, remyelination berterusan yang sangat cekap dalam
00: 17: 40.19 korteks boleh berkurang dengan tempoh penyakit. Oleh itu, tinggalkan
00: 17: 46.02 kawasan kortikal subpial yang benar-benar demelin
00: 17: 50.14 maka sangat mudah untuk dilihat seperti yang dilihat di sini dalam gambar ini.
00:17:56.17 Slaid ini benar-benar mempunyai dua tujuan. Jadi skema tangan kanan dihidupkan
00: 18: 02.17 satu sisi, menunjukkan perbezaan antara perkara putih
00:18:06.23 demielinasi dalam warna hijau, dan di sini terutamanya periventrikular, seperti yang ditunjukkan
00: 18: 11.04 di sini. Dan demyelinasi kortikal ditunjukkan dengan warna oren di sini, sungguh
00:18:17.08 melebihi jumlah penyahmielinan bahan putih di sini
00: 18: 21.01 sejauh ini. Sebaliknya, apa yang juga mudah dilihat mengenai perkara ini
00:18:26.16 bahagian otak hadapan, dan terutamanya dilihat pada skema sebelah kiri di sini, adalah
00: 18: 31.16 atrofi otak penting yang terdapat pada tahap kronik
00: 18: 35.23 Pesakit MS yang juga sudah mula di awal penyakit. Dan
00: 18: 40.12 mungkin, tanda pertama sama. Di sana saya memikirkan terutamanya
00:18:44.19 data MRI mengenai atrofi kortikal, seperti dalam tanda awal pesakit
00: 18: 51.04 yang benar-benar berubah menjadi penyakit progresif sekunder.
00: 18: 54.13 Apa ciri-ciri asas yang menyumbang kepada atrofi ini
00:19:02.22 otak MS? Dan terutamanya pada atrofi kortikal. Dan di sana
00: 19: 07.10 selama bertahun-tahun terakhir, benar-benar gagasan muncul dalam neuropatologi
00:19:12.12 bahawa ia bukanlah kerosakan atau kerosakan neuropatologi sebenarnya
00: 19: 17.14 neuron dan akson. Ia bukan sahaja berkaitan dengan lesi fokus. Dan tidak
00: 19: 21.24 bahkan berkorelasi dengan baik dengan lesi fokus, tetapi sebaliknya
00: 19: 25.16 fenomena. Dan ada banyak karya oleh Doron Merkler
00: 19: 30.04 menyumbang. Di mana mereka menunjukkan kehilangan tulang belakang dalam pelbagai sklerosis
00: 19: 33.17 korteks, tidak bergantung kepada demyelinasi fokus. Apa yang boleh sekarang
00:19:40.16 remyelination menambah gambaran sklerosis berbilang kita?
00: 19: 43.28 Remyelination di MS telah dibincangkan selama beberapa dekad.
00: 19: 48.12 Dan yang paling menonjol ialah John Prineas menggambarkan
00:19:53.02 morfologi remyelination dalam otak MS, seperti yang ditunjukkan di sini
00: 19: 57.25 dalam makalah Tahunan Neurologi ini, yang ditunjukkan dengan baik
00:20:01.04 akson dengan sarung mielin nipis yang menunjukkan remielin
00:20:08.07 di sini dalam plak MS ini. Di sebelah kiri, apa yang sebenarnya anda lihat
00: 20: 12.02 adalah plak bayangan yang direnovasi sepenuhnya. Dan saya rasa ini betul-betul
00: 20: 15.25 gol, ini adalah tempat yang ingin kami tuju. Inilah yang kita
00: 20: 20.13 ingin mencapai semua luka, untuk semua pesakit kita.
00: 20: 23.20 Oleh itu, hendaklah mereka mengingat kembali sepenuhnya setelah waktu tertentu.
00:20:28.04 Adakah matlamat itu berguna dalam apa jua cara? Dan Mikael sudah
00: 20: 34.28 membincangkan bahawa penyesuaian semula nampaknya paling banyak
00:20:38.25 atau mungkin merupakan terapi perlindungan paling akson yang kami mungkin
00: 20: 43.01 mempunyai. Walau bagaimanapun, saya fikir beberapa kerja lanjut perlu dilakukan
00:20:47.19 untuk benar-benar menunjukkannya secara rasmi, terutamanya dalam vivo dalam pesakit.
00: 20: 51.11 Kami melakukan sedikit kerja ke arah itu, dan menunjukkan di sini, sebagai contoh,
00: 20: 56.16 bahawa ketumpatan aksonal lebih tinggi dalam remyelinated berbanding
00: 21: 00.18 kawasan lesi demelel. Walau bagaimanapun, sudah tentu, seseorang harus
00:21:04.26 sedar di sini, apa itu ayam dan apa itu telur.
00: 21: 07.02 Mungkin juga bahawa pengulangan semula berlaku lebih banyak lagi
00: 21: 10.08 dengan mudah di kawasan lesi yang mengalami kerosakan dan
00:21:14.22 mungkin pada akson yang lebih tinggi dan mungkin juga OPC yang lebih tinggi
Ketumpatan 00: 21: 18.18 di sini. Tetapi, kawasan remyelinated pada umumnya kelihatan banyak
00:21:23.08 lebih baik daripada kawasan demielin. Bagaimana dengan oligodendroglia
00:21:28.22 yang sememangnya kita perlukan jika kita mahu mendorong dan merangsang
00:21:32.10 remyelination? Adakah mereka mengalami luka kronik? Bilakah mereka
00: 21: 36.20 hilang? Sebahagian daripada soalan ini masih terbuka. Dan kami cuba
00:21:41.25 lebih dekat dengan beberapa aspek ini dalam kerja baru-baru ini, di mana kami melihat
00: 21: 47.24 ketumpatan oligodendroglial pada lesi demelel kortikal. Dan di mana kita
00:21:51.25 melihat bahawa sebenarnya dalam keadaan demielinasi kortikal kronik,
00: 21: 57.10 Sel positif NogoA, dan juga sel positif Olig2, hilang
00: 22: 02.22 sangat rendah. Walau bagaimanapun, dalam lesi terdahulu, oligodendroglia
Kepadatan 00: 22: 07.07 jauh lebih baik, malah lebih baik daripada biasa.
00:22:13.11 Jadi juga rangsangan kepadatan oligodendroglia. Walau bagaimanapun,
00:22:18.17 Saya rasa kita masih kurang pengetahuan tentang mod dan juga
00: 22: 22.26 masa kematian sel. Dan mungkin terapi kita tidak seharusnya
00: 22: 27.17 tunggu terlalu lama, tetapi sasarkan luka yang lebih awal jika boleh.
00: 22: 35.22 Langkah maju yang besar berkaitan dengan tujuan kita untuk merangsang
00:22:42.02 terapi pro-remielinative sememangnya pengesanan remyelination
00: 22: 47.17 myelin in vivo. Dan di sana, saya fikir dalam tahun-tahun terakhir, yang penting
00:22:52.06 kemajuan telah dibuat dengan pengimejan PET. Dan ini adalah kajian dengan ini
00: 22: 58.11 Bruno Stankoff yang saya tunjukkan di sini dari Paris, yang menindaklanjutinya
00:23:02.10 pesakit dan kemudian mengenal pasti lesi individu dan mengenal pasti
00: 23: 06.16 pada dasarnya pembaikan myelin, pemulihan semula pada pesakit-pesakit ini. Dan saya fikir ini akan
00:23:13.02 sangat berguna untuk masa hadapan. Di satu pihak, untuk mewujudkan
00: 23: 17.17 kesan pelindung neuron dan akson dari remyelination, dan
00: 23: 22.19 sebaliknya, sebagai pembacaan in vivo untuk pro-remyelinative kami
00: 23: 26.18 terapi. Jadi untuk meringkaskan apa yang saya katakan, MS secara patologi sangat
00: 23: 35.06 ciri. Ini menunjukkan lesi sentrifugal ciri. Kita masih perlu
00: 23: 41.07 kenal pasti apa yang sebenarnya mendasari lesi spesifik ini, atau corak lesi
00: 23: 45.29 formasi. Di samping itu, bagaimanapun, ia adalah meresap dengan ketara dan tidak fokus
00: 23: 50.12 patologi. Dan juga berkorelasi radang dan tidak radang
00:23:54.19 penyakit progresif, dan mereka belum difahami sepenuhnya.
00: 23: 58.06 Dan kita benar-benar perlu mengetahui lebih lanjut mengenai perkara itu agar dapat sepenuhnya
00: 24: 02.13 untuk merawat aspek penyakit ini pada pesakit kita. Juga patomekanisme
00: 24: 07.19 kerosakan myelin dan kematian oligodendrocyte belum difahami sepenuhnya.
00:24:11.05 Dan, seperti yang Mika juga sebutkan, remielin hanya berkesan dalam
00: 24: 16.23 sebahagian kecil, kira-kira 20%, pesakit.
00: 24: 20.26 Jadi, saya jelaskan sebagai tujuan penyelidikan untuk terus diperbaiki
00:24:27.08 pemahaman kami tentang patogenesis MS dan evolusi lesi.
00: 24: 30.02 Untuk menunjukkan secara rasmi kesan neuroprotektif
00: 24: 33.29 remyelination, idealnya in vivo menggunakan teknologi pengimejan baru.
00:24:37.28 Dan kemudian juga dari sisi biologi sel, untuk mengenal pasti cara untuk
00: 24: 43.16 melindungi dan merangsang OPC dalam MS yang berkembang dan terbentuk
00:24:48.06 luka. Dengan itu sudah tentu, saya ingin mengucapkan terima kasih kepada semua orang yang menyumbang
00: 24: 53.08 ini berfungsi, dan anda untuk mendengar. Terima kasih banyak-banyak.

  • Bahagian 1: Myelination, Remyelination dan Multiple Sclerosis

Pesakit leukemia limfositik kronik (CLL) berkembang lebih awal pada ibrutinib sering mengalami transformasi Richter (RT) dengan jangka pendek bertahan sekitar 4 bulan. Kajian praklinikal menunjukkan bahawa jalan kematian 1 (PD-1) yang diprogramkan sangat penting untuk menghalang pengawasan imun di CLL. Kajian fasa 2 ini direka untuk menguji keberkesanan dan keselamatan pembrolizumab, antibodi penyekat PD-1 yang dimanusiakan, pada dos 200 mg setiap 3 minggu dalam CLL yang berulang dan berubah. Dua puluh lima pesakit termasuk 16 CLL kambuh dan 9 RT (semua limfoma sel besar tersebar terbukti) dimasukkan, dan 60% menerima ibrutinib sebelumnya. Respons objektif diperhatikan pada 4 dari 9 pesakit RT (44%) dan pada 0 daripada 16 pesakit CLL (0%). Semua tindak balas diperhatikan dalam pesakit RT yang mengalami perkembangan selepas terapi sebelumnya dengan ibrutinib. Setelah masa tindak lanjut rata-rata 11 bulan, kelangsungan hidup keseluruhan median dalam kohort RT adalah 10.7 bulan, tetapi tidak dicapai pada pesakit RT yang mengalami kemajuan setelah ibrutinib sebelumnya. Kejadian yang berkaitan dengan rawatan tahap 3 atau ke atas dilaporkan pada 15 (60%) pesakit dan dapat diatasi. Analisis spesimen tumor prarawatan daripada pesakit yang ada mendedahkan peningkatan ekspresi PD-ligan 1 (PD-L1) dan trend peningkatan ekspresi dalam PD-1 dalam persekitaran mikro tumor pada pesakit yang telah mengesahkan tindak balas. Secara keseluruhan, pembrolizumab menunjukkan keberkesanan selektif pada pesakit CLL dengan RT. Keputusan kajian ini adalah yang pertama menunjukkan manfaat sekatan PD-1 dalam pesakit CLL dengan RT, dan boleh mengubah landskap terapi untuk pesakit RT jika disahkan selanjutnya. Percubaan ini telah didaftarkan di www.clinicaltrials.gov sebagai #NCT02332980.

Landskap rawatan leukemia limfositik kronik (CLL) yang kambuh telah berubah dengan pengenalan perencat isyarat baru, termasuk perencat Bruton tirosin kinase ibrutinib, perencat PI3Kδ idelalisib, dan venetoklaks perencat limfoma sel 2 (BCL-2). 1-4 Walaupun hasil klinikal meningkat, pesakit CLL terus maju dari masa ke masa, 1 dan pesakit CLL yang maju lebih awal ketika menerima ibrutinib sering mengalami transformasi Richter (RT), transformasi menjadi limfoma agresif. Sehingga kini, pesakit CLL yang mengembangkan RT semasa menerima ibrutinib mempunyai kelangsungan hidup keseluruhan (OS) yang sangat pendek (∼4 bulan) 5,6 dan ini menunjukkan keperluan klinikal yang tidak terpenuhi.

Interaksi kematian terprogram 1 (PD-1) dengan ligannya merupakan pusat pemeriksaan imun utama yang dilakukan oleh sel-sel tumor untuk mengatasi pengawasan sel T-sel-aktif. Antibodi monoklonal immunoglobulin G4 (IgG4) manusia yang direka untuk menyekat interaksi antara PD-1 dan ligannya telah menunjukkan aktiviti klinikal yang ketara dalam tumor pepejal metastatik 7-12 dan limfoma Hodgkin (HL), 13 tetapi masih belum dikaji secara meluas dalam CLL berulang. atau RT.

Bukti terkumpul telah muncul berkaitan dengan ekspresi PD-1 dan ligannya dalam beberapa jenis non-HL (NHL), termasuk CLL. 14-18 Sel T ingatan efektor atau efektor yang letih dalam pesakit CLL mengekspresikan PD-1 secara berlebihan dan rosak untuk membentuk sinaps imun dengan sel B leukemik. 19-21 Inkubasi penghalang PD-1 dengan sel CLL T mengembalikan sinaps imun yang normal antara sel T periferal dan sel leukemia CLL. 19-21 Data terbaru telah menunjukkan bahawa menyekat laluan PD-1 dengan antibodi PD-ligand 1 (PD-L1) akan membatalkan perkembangan penyakit CLL dalam model tetikus CLL (transgenik Tcl-1). 22,23 Data klinikal awal menunjukkan keberkesanan antibodi PD-1 dalam keganasan hematologi terpilih, termasuk BCL besar (DLBCL) 24,25 meresap dan NHL lain. 25,26

Memandangkan data di atas, kami membuat hipotesis bahawa menyekat interaksi PD-1 dengan ligannya akan mengatasi pengelakan imun pada pesakit dengan CLL dan RT yang berulang. Untuk menguji hipotesis ini, kami menjalankan percubaan klinikal fasa 2 yang dimulakan penyiasat (#NCT02332980) untuk menilai keselamatan dan aktiviti klinikal pembrolizumab antibodi penyekat PD-1 dalam CLL berulang atau refraktori dan NHL sel B gred rendah (folikular). , pesakit zon marginal, dan limfoma lymphoplasmacytic). Kami juga memasukkan penggunaan pembrolizumab dalam RT kerana ∼50% pesakit dengan RT mengalami gangguan TP53 yang biasanya dikaitkan dengan ketidakstabilan genom, 27,28 dan kanser dengan beban mutasi somatik tinggi / kerumitan genom cenderung bertindak balas terhadap sekatan PD-1. 29 Di sini, kami melaporkan hasil dalam kelompok CLL percubaan fasa 2 ini, termasuk pesakit CLL dengan RT.


Bahagian 2: Sel Stem dan Tumor Otak

00:00:01.21 Hello. Nama saya Alfredo Quinones-Hinojosa. Saya seorang profesor bersekutu
00:00:05.21 Pembedahan Saraf, Onkologi, Perubatan Selular dan Molekul dan Neurosains
00: 00: 10.07 di Universiti Johns Hopkins.
00: 00: 12.11 Hari ini, saya dengan senang hati bercakap dengan anda mengenai masalah sel stem dan tumor otak.
00:00:18.11 Persoalannya ialah sama ada terdapat sel atau tidak
00: 00: 24.20 yang telah menimbulkan barah otak,
00:00:29.11 dan sama ada sel itu adalah sel stem saraf biasa atau tidak
00:00:33.10 yang telah menimbulkan tumor otak,
00: 00: 36.10 atau tidak atau tidak ada sel stem tumor otak atau tidak
00: 00: 40.13 populasi dalam barah otak.
00: 00: 42.21 Dan kita akan terus menerus meneroka perkara ini.
00: 00: 45.02 Saya akan memberitahu anda sedikit mengenai sejarah.
00:00:47.08 Pada pendapat saya, organ yang paling cantik dalam badan ialah otak,
00: 00: 50.15 dan ini adalah pembinaan semula 3 dimensi MRI.
00: 00: 53.05 Dan apa yang anda tidak nampak di sini
00:00:56.28 ialah, di bahagian kiri otak, iaitu kawasan ini di sini --
00: 01: 01.01 ingat gambar itu dibalik.
00: 01: 03.20 Kami telah melakukan ini, di sini, anda tahu, dalam kes ini label L untuk kiri
00:01:08.29 dan anda melihat, anda sendiri, pada otak ini, secara bersemuka,
00: 01: 12.00 seperti ini. Ini bahagian kiri. Di bawah ini,
00: 01: 15.08 adalah tumor otak yang sangat berbahaya,
00: 01: 18.12 juga dikenali sebagai glioblastoma multiforme.
00: 01: 21.12 Lebih dari 100 tahun yang lalu, Santiago Ramon y Cajal memenangi Hadiah Nobel Fisiologi dan Perubatan
00: 01: 27.07 kerana dia dapat memberi sumbangan besar dalam bidang neurosains
00:01:31.27 dengan melihat pelbagai jenis sel yang membuat otak.
00: 01: 37.00 Dia mengatakan bahawa kami mempunyai keputusan yang keras
00: 01: 40.27 bahawa segala-galanya mungkin mati, dan tidak ada yang dapat dijana semula dalam sistem saraf pusat dewasa.
00:01:47.08 Dia membiarkan kemungkinan terbuka untuk penyakit patologi.
00: 01: 52.03 Dia adalah ahli patologi dengan latihan dan menjadi salah seorang ahli sains saraf yang hebat di dunia.
00: 01: 58.20 Selama 30-40 minit akan datang, saya akan membahas sejarah anda
00:02:04.11 kontroversi mengenai neurogenesis dewasa,
00: 02: 06.19 perbezaan antara niche sel stem manusia berbanding tikus -
00:02:13.00 lebih khusus, zon sub-ventrikel.
00:02:16.09 Saya akan mengambil alih anda sama ada terdapat atau tidak sel stem yang ditemui
00: 02: 21.20 di otak manusia, dan sama ada atau tidak
00: 02: 24.08 terdapat sel stem yang terdapat pada barah manusia.
00: 02: 29.03 Persoalan yang masih ada ialah sama ada sel stem neural atau sel induk atau tidak
00: 02: 34.18 boleh menimbulkan sel stem tumor otak, dan ini sedang berjalan,
00:02:40.01 dan saya akan menghuraikan sedikit perkara itu.
00: 02: 43.11 Bagaimana dengan isu kontroversi neurogenesis dewasa ini?
00: 02: 46.20 Nah, ternyata sejak awal 1900-an,
00:02:51.15 Santiago Ramon y Cajal tahu bahawa kita mempunyai batasan dalam teknologi.
00: 02: 56.07 Dia pernah mengatakan bahawa tidak ada kaedah yang digunakan oleh penyiasat ini
00: 02: 59.22 mampu membezakan sel neuroglia yang berlipat ganda
00:03:07.06 daripada neuron mitosis kecil.
00: 03: 10.03 Oleh itu, persoalannya ialah sama ada terdapat neuron baru atau tidak
00:03:13.01 sedang dibentuk dalam otak mamalia dewasa.
00:03:16.27 Menjelang 1960-an, Joseph Altman, dengan melakukan kajian dengan bukti autoradiografi timidin,
00: 03: 26.26 dia dapat menemui neuron baru pada tikus dan kucing dewasa.
00: 03: 33.25 Tetapi, akan berlaku beberapa tahun kemudian, pada tahun 1970-an,
00: 03: 37.12 ketika Michael Kaplan, dia menggabungkan pelabelan thymidine
00: 03: 41.18 dan mikroskop elektron. Ini adalah penyelidikan awal dan penggunaan awal
00: 03: 48.02 mikroskop elektron yang mengesahkan tuntutan Altman
00: 03: 53.16 dengan menunjukkan prekursor neuron mitosis yang melapisi ventrikel lateral.
00:03:59.05 Tetapi, orang ramai masih ragu-ragu.
00: 04: 02.11 Agak sukar difahami dan dipercayai
00: 04: 05.26 bahawa memang, neuron baru dihasilkan di ventrikel lateral otak mamalia.
00:04:11.29 Menjelang 1980-an, Nottebohm dan rakan sekerja, keluar dari New York,
00: 04: 16.23 adalah, dengan melakukan beberapa kajian yang sangat fasih
00:04:20.17 dalam otak burung, mereka dapat, melalui satu siri eksperimen, untuk menunjukkan beberapa perkara.
00:04:27.15 Penghasilan sel baru dengan pelabelan timidin.
00: 04: 31.28 Mereka dapat menunjukkan bahawa sel-sel baru ini bukan hanya neuron,
00: 04: 36.05 tetapi mereka juga menerima sinaps.
00: 04: 38.22 Dan yang paling penting, neuron ini yang menerima sinaps
00: 04: 42.23 membalas suara dengan potensi tindakan.
00:04:46.24 Namun, orang ramai sangat skeptikal tentang isu itu
00: 04: 52.07 neurogenesis di otak burung
00: 04: 55.14 kerana mereka mengatakan bahawa itu bukan otak mamalia.
00:04:58.10 Jadi, menjelang 1990-an, kerjakan tikus itu,
00: 05: 01.21 dari beberapa makmal di seluruh dunia, mereka mula membongkar
00: 05: 06.16 dan mengajar kami lebih banyak mengenai isu ini mengenai kontroversi neurogenesis.
00:05:11.08 Menjelang 1997, sekumpulan penyiasat diketuai oleh Dr. Arturo Alvarez-Buylla,
00: 05: 17.14 juga keluar dari New York dan seterusnya keluar dari California,
00:05:21.11 dapat menjelaskan organisasi dan cytoarchitecture
00:05:26.18 zon sub-ventrikel tikus.
00: 05: 29.14 Tetapi tahun 1999, penemuan yang sangat penting yang juga kontroversial -
00: 05: 34.23 beberapa kumpulan percaya bahawa terdapat sel ependymal
00: 05: 37.28 yang bertanggungjawab untuk neuron. Dan Arturo dan kumpulannya,
00:05:42.11 mempercayai bahawa ia sebenarnya adalah astrosit, dapat menunjukkan
00: 05: 46.00 bahawa sel induk saraf dewasa sebenarnya berasal dari astrosit di otak tikus.
00: 05: 52.12 Apa yang tidak diketahui ketika ini
00: 05: 55.29 adakah ini berlaku atau tidak untuk otak manusia.
00: 06: 00.03 Lebih kurang diketahui perbezaan dalam ceruk sel stem ini -
00:06:04.29 zon sub-ventrikular -- antara manusia dan tikus.
00:06:09.22 Dan itulah bahagian seterusnya perbincangan ini.
00:06:12.12 Beberapa tahun kemudian, menjelang tahun 2003-2004,
00: 06: 19.04 sebagai Arturo dan kumpulannya, dan saya sendiri terlibat dalam beberapa kajian ini,
00: 06: 23.15 kami mula membongkar beberapa misteri organisasi
00: 06: 28.28 dari zon sub-ventrikel manusia.
00:06:31.20 Kami mula melihat penanda penghijrahan, dalam kes ini,
00:06:35.20 PSANCAM dan penanda percambahan, KI67,
00:06:40.15 dan penanda prekursor neuron, TuJ1.
00: 06: 44.14 Dan kami melihat beberapa bahagian otak.
00: 06: 47.07 Ini adalah tanduk anterior, badan ventrikel,
00: 06: 49.19 bahagian ventrikel yang lain, seperti yang anda lihat,
00:06:53.01 sehingga ke tanduk temporal, di sini di bahagian bawah.
00:06:56.07 Dan apa yang anda boleh lihat, sebenarnya, bukan sahaja organisasi
00:07:00.09 berbeza -- terdapat bukti percambahan, penghijrahan,
00: 07: 03.20 tetapi kami juga menemui bukti beberapa neuron bergelut
00: 07: 07.18 ke kawasan zon sub-ventrikel ini,
00: 07: 10.21 naik dan turun.
00:07:12.18 Jadi, selepas bertahun-tahun melihat organisasi
00:07:15.12 zon sub-ventrikel tikus, dilakukan oleh banyak kumpulan di seluruh Amerika Syarikat
00:07:19.22 dan dunia,
00: 07: 20.10 kami mula melihat organisasi zon sub-ventrikel manusia.
00: 07: 25.05 Dan sebenarnya anda boleh lihat di sini. dalam merah
00: 07: 27.18 adalah GFAP, dan biru adalah DAPI.
00:07:30.11 Untuk zon sub-ventrikel tikus, anda sebenarnya boleh melihat
00:07:33.22 GFAP dalam warna hijau, double cortin dalam warna merah, dan DAPI dalam warna biru.
00:07:38.10 Dan kemudian terdapat ilustrasi kartun antara zon sub-ventrikel manusia
00: 07: 43.06 dan zon sub-ventrikel tikus.
00: 07: 45.17 Di zon sub-ventrikel tikus, otak bukan sahaja sedikit lebih banyak
00: 07: 49.16 lissencephalic dalam arca. Ini bermakna ia mempunyai kurang alur
00:07:53.18 berbanding dengan otak manusia. Tetapi, di kawasan zon sub-ventrikular --
00: 07: 57.20 itu adalah dinding lateral ventrikel di sini.
00: 07: 59.15 Ini adalah penguat. Anda sebenarnya dapat melihat sekumpulan sel
00:08:03.12 baru keluar. Juga dikenali sebagai aliran migrasi rostral.
00:08:07.11 Dan astrosit ini dikimpal sepenuhnya terhadap zon epindemal.
00: 08: 12.16 Namun, di otak manusia, terdapat zon epyndemal di sini,
00: 08: 16.12 yang dipanggil lapisan 1. Kemudian lapisan 2 adalah jurang hiposelular.
00: 08: 20.03 Kemudian lapisan 3 adalah pita astrosit.
00:08:23.08 Dan kemudian terdapat peralihan kepada parenkim.
00:08:26.15 Perbezaan yang ketara antara organisasi zon sub-ventrikel manusia
00:08:31.04 dan zon sub-ventrikel tikus.
00: 08: 34.06 Oleh itu, kami berminat di makmal kami untuk menjelaskan lebih lanjut
00: 08: 37.28 organisasi zon sub-ventrikel manusia.
00: 08: 40.20 Kami terus melakukan kajian serupa di otak manusia janin.
00:08:46.17 Dan sememangnya, nampaknya ventrikel sisi mungkin bersambung juga
00:08:52.00 ke aliran migrasi rostral, sepanjang jalan ke bawah
00:08:55.18 melawan mentol olfaktori. Ini adalah apa yang disebut
00: 08: 57.17 bahagian sagital di rantau ini yang sedikit serong di sini
00: 09: 02.23 dan sedikit condong, seperti yang anda lihat
00:09:04.04 di sini, dan kami dapat mengkaji pelbagai kawasan bahagian otak ini,
00:09:09.18 cuba memahami bagaimana otak janin dan otak manusia disusun
00:09:15.16 berbanding dengan otak tikus.
00: 09: 18.28 Adakah populasi sel yang berhijrah?
00: 09: 22.09 Ternyata kami menjumpai beberapa bukti
00: 09: 26.18 terdapat beberapa sel yang kelihatan berpindah ke luar wilayah ini.
00:09:31.03 Tidak semestinya cara yang sama seperti mereka kelihatan berhijrah dalam otak tikus,
00:09:36.07 dari ventrikel turun ke mentol olfaktori,
00:09:39.00 tetapi sememangnya beberapa sel ini kelihatan berhijrah dalam kumpulan,
00: 09: 43.06 dan mereka dikelilingi oleh sel glial ini. Ini adalah mikroskopi confocal
00: 09: 47.23 kawasan seperti itu di otak janin manusia,
00:09:51.02 dan malangnya, kumpulan kami, tidak dapat mencari bukti
00:09:55.19 daripada jenis penghijrahan yang serupa dalam otak manusia
00:09:58.27 per se, dalam otak dewasa manusia,
00: 10: 02.09 tetapi kumpulan lain di seluruh dunia telah mendakwa bahawa ini memang wujud.
00: 10: 06.14 Oleh itu, persoalannya adalah, jika migrasi wujud di otak manusia,
00: 10: 10.05 bolehkah kita mempelajari sesuatu mengenai penghijrahan itu
00:10:13.27 yang akan membantu kita memahami mengapa tumor otak sangat berhijrah?
00:10:18.02 Ini adalah imej yang saya akan tunjukkan kepada anda tentang sekeping kecil otak janin manusia
00:10:23.03 yang diletakkan pada Matrigel, di mana anda akan melihat bukti sel berhijrah
00: 10: 27.23 dikelilingi oleh kepingan glial.
00: 10: 30.07 Dan inilah gambarnya, di sini. Inilah filemnya.
00:10:32.21 Anda sebenarnya boleh melihat -- ini dari makmal kami sendiri -- sel yang berhijrah,
00:10:36.21 dan ini adalah otak janin manusia.
00:10:38.07 Mereka berhijrah keluar, dan mereka dikelilingi.
00: 10: 42.05 Dan kami telah melakukan semua imunostain ini untuk dapat melihat bahawa, memang,
00: 10: 45.26 otak janin manusia mungkin mempunyai beberapa persamaan berkaitan dengan penghijrahan
00: 10: 51.13 berbanding dengan otak tikus.
00:10:55.05 Kami telah melakukan kajian serupa, seperti yang anda boleh bayangkan, dengan tumor otak manusia
00:10:59.15 dan kami sedang dalam proses untuk membongkar beberapa misteri
00:11:03.16 yang digunakan oleh tumor otak manusia untuk penghijrahan.
00: 11: 07.04 Saya akan membawa anda. Oleh itu, kita telah mengatasi kontroversi neurogenesis dewasa
00: 11: 11.26 dan saya rasa jelas bahawa otak mamalia mempunyai kemampuan
00:11:16.00 untuk menjana beberapa neuron, sekurang-kurangnya dalam otak tikus.
00:11:18.29 Dan bukti yang sama sebenarnya mungkin menjadi lebih jelas
00:11:23.25 dalam otak manusia dewasa.
00: 11: 26.00 Kita tahu bahawa ceruk sel stem - dalam hal ini zon sub-ventrikel -
00: 11: 30.09 berbeza antara manusia dan tikus.
00: 11: 33.04 Persoalannya ialah sama ada terdapat sel stem atau tidak
00:11:36.09 dalam otak manusia, dan sama ada terdapat atau tidak sel stem dalam kanser manusia.
00:11:40.03 Jadi, mungkinkah terdapat sel stem saraf dewasa manusia?
00:11:45.02 Menjelang 1990-an, Steve Goldman dan rakan-rakannya, mereka melakukan beberapa kajian
00: 11: 49.11 dan menerbitkan makalah mengenai mencari neurogenesis dewasa
00: 11: 53.24 dari zon sub-ventrikel tanduk temporal in vitro.
00: 11: 57.11 Ini adalah dari pembedahan tanduk temporal, di mana mereka melakukan reseksi lobus temporal
00:12:04.12 dan dapat menkultur tisu ini dan mencipta neuron
00:12:07.10 buat pertama kali, menunjukkan bahawa sesungguhnya, sekurang-kurangnya dalam cawan petri,
00:12:11.06 mungkin.
00: 12: 12.12 Pada tahun 1990-an, Gage dan rakan-rakannya menunjukkan kajian
00: 12: 16.08 dengan melihat bedah siasat otak - mereka menyebutnya secara in vivo, tetapi bedah siasat -
00: 12: 22.08 di mana mereka menunjukkan neurogenesis pada hipokampus manusia dewasa.
00:12:27.11 Dan saya berada di sebelah kanan hippocampus sekarang
00:12:29.28 Saya menunjukkan satu gambar khusus, dan perkara yang anda boleh lihat sebenarnya
00:12:33.06 di sini, dalam sel khusus di sini yang ditanda
00: 12: 37.02 dengan dua penanda - merah adalah NeuN seperti yang anda lihat di sini
00: 12: 41.13 dan hijau adalah BrdU, jadi ini nampaknya pembentukan neuron.
00: 12: 46.19 Pesakit ini sebenarnya telah menerima BrdU untuk rawatan penyakit lain.
00:12:51.29 Mereka meninggal dunia, dan kumpulan ini dapat memperoleh otak mereka
00:12:56.09 dan lakukan kajian ini. Untuk kali pertama,
00:12:59.01 membekukan tisu ini dalam masa, mereka dapat mencari bukti neuron baru
00: 13: 04.14 terbentuk di hipokampus manusia dewasa.
00: 13: 09.14 Oleh itu, kami bertanya kepada diri sendiri soalan yang sama.
00: 13: 13.14 Menjelang tahun 2004, kami bertanya - kami menerbitkan makalah di mana kami mengemukakan soalan kepada diri sendiri:
00:13:18.09 Zon sub-ventrikel manusia dewasa berpotensi mempunyai sel stem saraf?
00:13:24.07 Kami sebenarnya mendapatkan spesimen dari bilik bedah.
00:13:27.22 Kami melihat secara khusus spesimen dari zon sub-ventrikel,
00: 13: 31.08 dan kami dapat membentuk sfera kecil yang indah ini.
00: 13: 35.11 Kami memanggil mereka neurosfera.
00: 13: 37.05 Kami membersihkan astrosit zon sub-ventrikel ini.
00:13:41.09 Ini bermakna, melalui prosedur, kita menggoncang sel,
00:13:44.07 dan pada akhirnya, dalam piring petri,
00:13:46.07 kami hanya meninggalkan astrosit. Dan kami dapat mencipta lebih banyak lagi
00: 13: 50.25 neurosfera berbanding episod di mana kita tidak membersihkan astrosit.
00: 13: 56.23 Dan kami memperoleh astrosit dari korteks dan striatum.
00:14:01.05 Kami sama sekali tidak mempunyai bukti pembentukan sfera,
00:14:04.14 memberitahu kami buat pertama kali bahawa memang ada sesuatu yang pelik
00:14:08.12 dalam astrosit yang terdapat di zon sub-ventrikel,
00: 14: 12.15 kerana tidak hanya ketika kita menyucikannya
00: 14: 15.01 kita dapati lebih banyak neurosfera, tetapi
00: 14: 19.02 juga apabila kita mempunyai astrosit yang sama atau astrosit yang serupa dari korteks dan striatum,
00:14:24.10 kami tidak menemui bukti neurosfera.
00:14:26.17 Ini adalah gambaran salah satu neurosfera sedemikian.
00:14:29.26 Dan bukan itu sahaja, apabila kami meletakkannya dalam media khas, kami dapat membentuk
00: 14: 35.07 keturunan: dalam kes ini, neuron,
00: 14: 37.20 dalam kes ini oligodendrocytes, seperti yang anda lihat di sini,
00: 14: 41.24 dan astrosit. Jadi, daripada salah satu sfera ini,
00:14:45.06 dari zon sub-ventrikel,
00:14:47.05 kami mendapati keupayaan sel ini --
00: 14: 50.24 ini adalah sfera yang berasal dari satu sel yang merupakan astrocyte.
00: 14: 55.08 Ia adalah sel positif GFAP,
00: 14: 57.25 dan kami membezakan sel, kami dapat menghasilkan 3 garis keturunan. Sekali lagi,
00:15:03.09 astrosit, neuron dan oligodendrosit.
00:15:07.11 Tetapi itu tidak mencukupi. Soalannya boleh
00: 15: 10.25 astrosit zon sub-ventrikel manusia
00: 15: 14.10 menghasilkan neuron tanpa kesan faktor pertumbuhan?
00: 15: 19.06 Jadi, apa yang kita buat di sini, adalah kita menyediakan persekitaran
00:15:22.19 di mana kita menggunakan astrosit dari otak manusia,
00:15:25.24 dan kemudian kami mendapat satu astrosit dari zon sub-ventrikel,
00:15:30.23 dan kami meletakkannya di sini
00: 15: 32.14 untuk melihat sama ada atau tidak, tanpa meletakkan faktor pertumbuhan eksogen,
00: 15: 37.06 sebenarnya kita dapat menghasilkan neuron.
00: 15: 40.00 Dan saya berada dalam salah satu eksperimen ini, dan anda sebenarnya dapat melihat
00:15:42.24 berwarna merah, neuron cantik yang telah terbentuk daripada astrosit
00:15:48.03 yang diperoleh daripada zon sub-ventrikular
00:15:50.15 tanpa menggunakan faktor pertumbuhan.
00: 15: 52.25 Kami cuba melakukan perkara yang sama dari astrosit kortikal dan striatal,
00: 15: 57.27 dan kami tidak dapat menghasilkan neuron.
00: 16: 00.25 Sekali lagi, memberitahu bahawa ada sesuatu mengenai astrosit sub-ventrikel
00:16:05.25 yang menjadikan sel-sel itu unik dan mampu
00:16:09.25 untuk menghasilkan neuron dalam otak manusia sebenar.
00:16:13.14 Sekarang, semua ini dilakukan dalam piring petri,
00: 16: 17.18 dan kami dapat menjumpai, untuk pertama kalinya,
00: 16: 21.19 bahawa di kawasan ventrikel lateral,
00: 16: 24.06 seperti yang anda dapat lihat di sini, ada
00:16:26.04 beberapa wilayah -- ini sebenarnya selepas mengkaji banyak spesimen,
00:16:30.29 bukan sahaja dari bilik bedah, tetapi juga dari tisu bedah siasat,
00:16:36.03 kami dapat menemuinya dalam ventrikel sisi
00: 16: 38.25 otak manusia, terdapat populasi astrocytes tertentu
00: 16: 43.23 yang dapat menimbulkan, bukan hanya pada bidang yang indah,
00: 16: 47.16 tetapi juga kepada neuron, oligodendrocytes, dan astrocytes,
00:16:51.17 dan yang paling penting, walaupun tanpa faktor pertumbuhan, kita sebenarnya boleh
00:16:56.06 menghasilkan satu neuron.
00:16:58.12 Jadi, memang, ada kemungkinan, sehingga kini,
00: 17: 02.19 apa yang kita tidak tahu sebelumnya, bahawa otak manusia
00: 17: 05.16 dalam piring petri, mempunyai kemampuan untuk menghasilkan neuron.
00: 17: 10.03 Jadi, mungkin ada populasi sel yang kita namakan sel stem
00:17:15.19 dalam kawasan zon sub-ventrikel ini.
00:17:18.01 Kumpulan lain terus melihat populasi sel ini dalam hippocampus,
00:17:25.01 dan mereka terus memajukan bidang ini ke hadapan.
00: 17: 28.11 Bagaimana dengan masalah sel stem pada barah manusia?
00: 17: 31.22 Itu adalah sesuatu yang jelas merupakan salah satu cabaran terbesar
00: 17: 36.17 yang kita alami, kerana barah masih merupakan penyakit yang paling teruk
00:17:40.29 diketahui manusia. Pada pendapat saya, organ yang paling cantik
00:17:45.22 terjejas oleh kanser yang paling dahsyat.
00: 17: 50.04 Salah satu masalah yang kita ada, pertama sekali,
00: 17: 52.24 adalah bahawa kita menghadapi tumor yang datang dari otak,
00: 17: 56.13 yang disebut tumor intraaksial.
00:17:58.12 Kita boleh mendapatkannya daripada glioma gred rendah (LGG)
00:18:02.03 kepada glioma gred tinggi (HGG).
00:18:05.10 Gred rendah kepada gred tinggi. Mereka semua berada dalam keluarga barah yang sama.
00: 18: 09.05 Sepanjang perjalanan dari kelas rendah ke kelas tinggi.
00: 18: 11.07 Saya percaya semakin rendah nilainya, semakin lama kelangsungan hidup pesakit.
00:18:15.11 Semakin tinggi gred, semakin menyusahkan pesakit.
00:18:20.07 Keterbatasan adalah bahawa kita berpotensi dalam pembedahan boleh resect
00:18:26.19 jisim ini yang boleh kita lihat di dalam bilik pembedahan.
00: 18: 30.27 Masalahnya ialah ketika pesakit-pesakit ini mendapat diagnosis barah otak,
00: 18: 35.00 khusus jika ia adalah glioma bermutu tinggi,
00: 18: 37.23 banyak sel sebenarnya telah berpindah ke bahagian otak yang bertentangan.
00:18:44.19 Dan saya memberitahu anda bahawa ini amat memusnahkan -- ini adalah pembunuhan besar-besaran.
00:18:48.29 Kira-kira 20,000 orang di Amerika Syarikat baru didiagnosis
00:18:54.02 dengan kanser otak primer.
00: 18: 57.20 Itulah barah yang baru saya tunjukkan kepada anda.
00: 18: 59.13 Itulah barah yang datang khas dari otak.
00: 19: 02.28 Dan kira-kira separuh daripada pesakit itu mati setiap tahun
00:19:07.08 akibat daripada tumor malignan ini.
00:19:10.06 Itu khususnya glioma -- itulah jenis tumor yang sedang kita bincangkan.
00:19:15.22 Kami telah melihat isu ini di makmal kami.
00: 19: 18.13 Anda tahu, saya berminat untuk memahami apakah ada hubungan atau tidak
00: 19: 22.18 antara glioblastoma multiforme dan ventrikel lateral.
00: 19: 26.24 Oleh itu, ingat, kita mengkaji ventrikel lateral di otak manusia normal,
00:19:30.04 dan kami tahu bahawa terdapat potensi populasi
00:19:32.19 sel yang kita panggil sel stem.
00:19:34.16 Jadi, bolehkah sel stem yang berpotensi ini menimbulkan tumor ini?
00: 19: 38.13 Kita mesti mengambil satu langkah pada satu masa.
00: 19: 40.26 Jadi, apa yang kami lakukan, adalah kami kembali ke pangkalan data kami di Johns Hopkins,
00: 19: 45.05 dan kami melihat peratus survival
00:19:48.28 dan bulan, di sini, dan kami melihat dua jenis pesakit:
00:19:53.18 yang melibatkan zon sub-ventrikular,
00:19:55.27 iaitu garisan gelap di sini,
00: 20: 00.29 seperti yang anda dapat lihat.
00: 20: 02.03 Dan kemudian kami melihat pesakit yang tidak terlibat dalam zon sub-ventrikel.
00: 20: 06.24 Dan ini adalah garis putus-putus di sini.
00:20:09.28 Dan kami melihat kelangsungan hidup. Apa yang kami perhatikan ialah pesakit tersebut
00:20:13.13 yang mempunyai tumor yang terlibat dalam zon sub-ventrikel,
00: 20: 16.21 yang mana betul di sini, yang merupakan jenis tumor di sini,
00: 20: 20.03 bertahan hanya 8 bulan.
00: 20: 23.17 Berbanding pesakit yang tidak terlibat dalam zon sub-ventrikel,
00:20:28.10 iaitu tumor jenis ini, di sini, bukan berhampiran ventrikel di sini.
00:20:32.23 Pesakit tersebut cenderung untuk bertahan selama 11 bulan. Dan ini ialah keluk Kaplan-Meier.
00: 20: 38.01 Oleh itu, buat pertama kalinya, memberi kami idea yang berpotensi dalam kawasan ini,
00: 20: 43.18 mungkin ada populasi yang menyumbang
00: 20: 47.08 atau berpotensi menimbulkan beberapa ketumbuhan ini.
00:20:50.16 Itu masih hipotesis kerja.
00:20:52.18 Hipotesis kerja adalah lurus ke hadapan.
00:20:56.00 Bagaimanakah tumor terbentuk?
00: 20: 57.14 Adakah tumor datang dari transformasi sel induk saraf
00: 21: 02.00 atau sel progenitor saraf yang kemudian diubah
00: 21: 05.14 menjadi sel stem tumor otak dan kemudian menimbulkan ketumbuhan yang merosakkan ini?
00:21:10.17 Adakah terdapat perubahan epigenetik dan genetik yang menimbulkan perubahan ini?
00:21:16.24 Adakah terdapat potensi penyahbezaan
00:21:20.06 antara neuron, astrocyte, atau oligodendrocyte yang menimbulkan
00: 21: 25.04 ke sel-sel progenitor neural ini, yang seterusnya menimbulkan
00: 21: 29.14 ke sel stem tumor otak?
00: 21: 31.21 Itu semua kerja sedang berjalan.
00:21:34.13 Intinya ialah tumor ini di sini
00:21:37.10 amat menyedihkan, dan cara kita melihat sekarang pada potensi
00:21:41.10 etiologi melalui transformasi sama ada sel stem saraf atau sel progenitor
00: 21: 45.27 menimbulkan sel stem tumor otak ini adalah benar
00: 21: 50.12 memberi kita harapan bahawa kita memerlukannya satu hari nanti
00: 21: 55.02 kita akan dapat memanipulasi sistem dan dapat memberi kesan positif kepada pesakit kita.
00:22:00.22 Saya tunjukkan kepada anda, bagaimana sekitar tahun 2004, apabila kami menerbitkan kertas kerja kami
00:22:04.20 dalam Alam, juga menunjukkan bahawa manusia mempunyai dalam ventrikel sisi
00: 22: 08.25 sel-sel induk saraf ini yang menimbulkan neuron
00: 22: 12.06 menyumbang kepada pemahaman kita mengenai zon sub-ventrikel manusia.
00:22:16.01 Pada masa yang sama, kumpulan dari Itali dan kumpulan dari Kanada,
00:22:21.16 mereka menunjukkan bahawa, sememangnya, apabila kita memperoleh tisu daripada
00: 22: 24.27 bilik operasi, dan kami mendapat ketumbuhan, dan kemudian kami menumbuhkannya.
00: 22: 28.23 Tumor, sama ada sebagai sfera kecil, yang disebut neurosfera,
00: 22: 33.23 mereka kelihatan sama seperti neurosfera, tetapi mereka dipanggil tumor tumor.
00: 22: 37.14 Atau kita mengasingkan sel-sel ini berdasarkan CD133.
00:22:42.24 Dan kami meneruskan dan meletakkan sama ada sfera atau sel kembali
00: 22: 47.06 di otak tikus, otak tikus ini menghasilkan tumor
00: 22: 52.13 yang kelihatan seperti tumor pesakit.
00:22:56.03 Dan sejak itu, kumpulan lain (termasuk kita sendiri)
00:22:59.02 sebenarnya telah menduplikasi beberapa kajian tersebut.
00: 23: 01.27 Oleh itu, buat pertama kalinya, memberi kita harapan
00: 23: 06.11 pada akhirnya, kemungkinan tumor ini sebenarnya dapat dikaji
00: 23: 13.05 ketika kami mendapatkan tisu dari pesakit dan membawanya ke makmal.
00: 23: 17.22 Jadi, untuk pertama kalinya, mula menjadikan pesakit kita sebagai sebahagian daripada diagnosis,
00:23:22.07 tetapi juga rawatan yang berpotensi
00: 23: 24.08 dan menjadikan mereka sebahagian daripada sejarah.
00: 23: 26.07 Tumor ini kelihatan lebih baik, dan menyerupai jauh lebih baik
00:23:30.24 tumor induk daripada beberapa talian sel yang telah kami gunakan
00:23:33.26 selama beberapa dekad sekarang.
00: 23: 35.16 Sekarang, terdapat persamaan antara sel stem saraf
00: 23: 39.24 dan sel stem tumor otak,
00: 23: 41.16 dari kemampuan migrasi ke isyarat.
00: 23: 45.12 Dan anda sebenarnya dapat melihat beberapa persamaan ini di sini.
00:23:48.22 Apa yang membuatkan sel stem tumor otak unik
00: 23: 52.23 adalah kenyataan bahawa mereka nampaknya mempunyai penyebaran jangka panjang yang lebih baik
00: 23: 57.16 pelabelan fenotip dua. Itu bermaksud bahawa
00:23:59.10 mereka sebenarnya boleh menanda dengan beberapa penanda.
00:24:02.17 Sekarang, inilah yang berpotensi membuat kita berfikir begitu
00: 24: 08.08 mungkin sel stem saraf, mereka mesti melakukan sesuatu dengan sel stem tumor otak.
00: 24: 12.15 Sekali lagi, ini adalah hipotesis yang saya fikir berpotensi pada masa akan datang,
00: 24: 17.11 kita akan dapat memahami secara sistematik sedikit sebanyak.
00: 24: 23.00 Yang kita tahu hari ini adalah dari zon sub-ventrikel,
00:24:26.27 daripada astrosit ini, kita boleh membentuk sfera ini, dan sfera ini pula boleh
00: 24: 32.10 menimbulkan tiga keturunan: neuron, oligodendrocytes, dan astrocytes,
00: 24: 36.13 yang sebenarnya dapat anda lihat di sini.
00:24:38.00 Apa yang kita tahu hari ini ialah jika kita mendapatkan tisu dari bilik bedah
00:24:43.01 daripada pesakit kami, kerana kami boleh mengembangkan satu sel tunggal
00: 24: 46.15 menjadi sfera, dan sfera itu akhirnya dapat kembali ke dalam haiwan,
00: 24: 51.03 tumor tersebut menyerupai tumor yang pada awalnya pesakit miliki.
00: 24: 56.10 Jadi, berpotensi memberi kita peluang untuk memperoleh yang lebih baik
00: 25: 00.21 model untuk mengkaji barah otak, dan itulah yang telah kita lakukan
00:25:05.14 dalam kerjasama kami, sebahagian daripada kerja kami.
00: 25: 07.13 Dan saya akan membahas beberapa kajian ini.
00: 25: 09.09 Sebagai contoh, ini adalah makalah yang baru sahaja kami terbitkan,
00:25:13.21 sebenarnya pada tahun 2009, di mana kami melihat Delta/Notch-like
00:25:19.09 reseptor berkaitan faktor pertumbuhan epidermis.
00: 25: 21.26 Ini adalah tumor yang berasal dari neurosfera glioblastoma multiforme.
00: 25: 27.05 Dan, seperti yang anda lihat di sini, ini adalah tumor
00: 25: 30.09 tanpa rawatan. Ini adalah tumor dengan rawatan.
00:25:34.28 Dalam kes ini, di sini, ini ialah nilai tumor, yang sebenarnya anda boleh lihat di sini.
00: 25: 39.29 Ini adalah dua kumpulan yang berbeza, dan sebenarnya anda boleh
00: 25: 42.09 melihat perbezaan yang ketara.
00:25:44.10 Sekali lagi, menggambarkan prinsip bahawa kita boleh bermimpi untuk memanipulasi sistem.
00:25:52.23 dan sangat sistematik mula memahami apakah faktor pertumbuhan, reseptor,
00: 25: 59.06 yang mempunyai pengaruh terhadap pembentukan tumor ini.
00: 26: 02.15 Saya akan membimbing anda melalui kajian lain yang telah kami buat
00: 26: 05.10 itu adalah Keluarga Transkripsi Faktor 9 seperti Kruppel,
00: 26: 10.21 faktor transkripsi berkaitan pembezaan yang
00:26:14.08 menyekat isyarat Notch I dan menghalang sel stem yang memulakan glioblastoma.
00: 26: 20.16 Ini adalah gambar sebenar di sini. Ini adalah kawalan.
00:26:23.29 Anda boleh melihat tumor besar, sama dengan tumor pesakit,
00:26:28.14 dan apabila kami merawat tumor ini,
00: 26: 30.18 untuk faktor ini secara khusus, anda dapat melihat pembentukan tumor lebih kurang
00: 26: 38.16 pada haiwan, dalam model tikus.
00: 26: 41.10 Dan anda sebenarnya dapat melihat di sini, di paksi ini
00: 26: 45.25 tidak lain, tetapi perbezaan yang nyata antara kawalan
00:26:50.27 dan mereka yang dirawat berkaitan saiz tumor di sini.
00: 26: 54.23 Dan di sinilah Kaplan-Meier untuk kelangsungan hidup kedua-dua kumpulan ini.
00: 26: 59.17 Itulah kawalan dan haiwan yang dirawat.
00:27:02.26 Dan ia satu perbezaan yang ketara, sekali lagi memberi kita
00:27:05.24 harapan bahawa kita boleh belajar daripada penyakit ini, yang kita boleh belajar daripadanya
00: 27: 10.13 sel-sel ini, bahawa apa yang kita pelajari dari sel-sel ini atau dari si mati ini
00: 27: 14.29 satu hari berpotensi digunakan untuk pesakit kita,
00: 27: 19.06 memberikan pandangan ini kepada kita.
00: 27: 20.06 Dan saya akan meninggalkan anda dengan kertas terakhir ini dari PNAS
00:27:23.02 yang baru kami terbitkan beberapa bulan lalu, yang kami lihat
00: 27: 26.15 Isyarat c-Met yang mendorong rangkaian pengaturcaraan semula
00: 27: 30.25 dan menyokong fenotip seperti batang glioblastoma.
00:27:32.16 Dan anda sebenarnya boleh melihat kawalan -- tumor yang sangat besar
00:27:36.04 dan mereka yang dirawat di sini, memberikan kami kawasan tumor.
00: 27: 39.29 Perbezaan antara kedua-duanya di sini.
00: 27: 41.27 Sekali lagi, buat pertama kalinya, memberi kita kemampuan untuk memanipulasi sistem.
00: 27: 46.27 Saya rasa, sekarang melalui kajian yang bukan sahaja kumpulan kita, tetapi kumpulan lain di seluruh dunia
00: 27: 51.18 lakukan pada bidang ini. pada sfera tumor ini,
00: 27: 55.20 bahawa apabila mereka dimasukkan kembali ke dalam haiwan, tumor itu kelihatan seperti tumor induk,
00: 27: 59.14 kita akan dapat membongkar misteri, isyarat,
00:28:05.05 ciri-ciri tumor ini, dan suatu hari nanti
00:28:07.19 kami akan dapat menghasilkan terapeutik baharu yang akan memberi kesan kepada pesakit kami.
00: 28: 14.29 Jadi, saya simpulkan dengan memberitahu anda bahawa ada
00: 28: 18.08 Neurogenesis dewasa di otak mamalia.
00: 28: 21.18 Terdapat ceruk sel stem, khususnya zon sub-ventrikel,
00: 28: 26.01 yang berbeza antara manusia dan otak mamalia tikus.
00:28:30.23 Dan itu sebenarnya perbezaan yang sangat penting, kerana
00: 28: 33.16 sepanjang tahun. sepanjang dekad,
00:28:37.03 kami terus mengkaji pembentukan tumor
00:28:39.24 dalam otak tikus -- pembentukan tumor tikus dalam otak tikus.
00: 28: 45.05 Dan saya rasa masih perlu untuk melakukannya
00: 28: 48.19 untuk terus membongkar beberapa mekanisme biasa
00: 28: 51.01 yang mungkin dimiliki otak tikus dengan otak manusia.
00: 28: 53.25 Tetapi saya juga berpendapat bahawa ia sangat penting
00:28:57.12 bahawa kami terus melakukan penyelidikan tisu manusia,
00: 29: 02.20 dan itu kerana terdapat perbezaan yang ketara antara manusia dan tikus,
00: 29: 08.13 dan kita mesti cuba memahami dari keduanya secara serentak.
00:29:12.06 Mereka memang wujud. Sel stem memang wujud
00: 29: 17.13 di otak manusia. Kami tahu itu. Kita telah melakukannya sendiri.
00: 29: 21.24 Kumpulan lain. Mereka wujud di zon sub-ventrikel, sekurang-kurangnya di petri dish.
00:29:26.03 Mereka wujud dalam hippocampus, dan itu adalah sesuatu yang sangat, sangat penting untuk dipertimbangkan
00: 29: 31.04 untuk kita memahami dan menggunakan kemampuan ini
00: 29: 34.09 untuk perubatan regeneratif masa depan.
00:29:36.21 Sel stem juga wujud dalam kanser manusia,
00:29:40.26 dan kami mula membongkar misteri
00: 29: 43.12 dan cara-cara untuk memanipulasi sistem ini sekarang.
00: 29: 47.23 Sama ada sel stem saraf menimbulkan tumor masih belum diketahui.
00: 29: 52.21 Saya fikir ini adalah hipotesis yang berfungsi.
00: 29: 55.28 Apa yang diketahui ialah populasi sel dalam tumor
00:29:59.18 yang berkelakuan seperti sel stem.
00: 30: 02.02 Dan ini sebenarnya sangat penting bagi kita untuk memahami
00: 30: 06.00 bukan sahaja etiologi, tetapi kemungkinan perkembangan barah otak.
00:30:11.00 Saya fikir masa depan cerah,
00:30:14.08 dan kami akan meneruskan usaha untuk mencari etiologi
00: 30: 19.07 tumor otak, sehingga berpotensi satu hari,
00: 30: 22.20 kita akan dapat mencari cara yang lebih baik untuk merawat pesakit kita.
00: 30: 28.00 Saya mengucapkan terima kasih banyak. Saya mengucapkan terima kasih kepada semua orang yang menyokong kerja kami
00:30:32.02 sepanjang tahun, termasuk NIH, Howard Hughes,
00: 30: 35.06 Tabung Penyelidikan Stem Cell Maryland State.
00: 30: 39.20 Dan yang paling penting, saya mengucapkan terima kasih kepada kumpulan saya.
00:30:43.14 Ini adalah kumpulan saintis muda yang telah membenarkan
00:30:45.13 saya belajar daripada mereka dan membenarkan saya mengajar mereka sedikit tentang apa yang saya tahu,
00: 30: 50.03 dan bersama-sama, kita berusaha mencari harapan untuk pesakit kita.
00: 30: 54.01 Saya mempunyai pekerjaan yang paling indah di dunia.
00: 30: 55.17 Setiap hari saya bekerja bukan sahaja sebagai pakar bedah otak,
00: 30: 58.02 memberi harapan kepada pesakit saya di bilik operasi,
00:31:00.25 tetapi diharapkan memberi mereka harapan juga di luar bilik pembedahan.
00: 31: 04.21 Terima kasih banyak.

  • Bahagian 1: Tumor Otak

Pesakit, bahan, dan kaedah

Pesakit

Pesakit yang layak adalah seropositif HIV oleh Western blot, mempunyai limfoma sel B yang agresif (klasifikasi Pertubuhan Kesihatan Sedunia), mempunyai fungsi organ yang mencukupi melainkan disebabkan oleh tumor, dan tidak dirawat. 19 Pesakit dengan jangkitan yang mencegah rawatan atau limfoma sistem saraf pusat utama tidak layak. Pesakit didaftarkan berturut-turut antara April 1995 dan Ogos 2000. Lembaga semakan institusi Institut Kanser Nasional meluluskan protokol dan semua pesakit memberikan persetujuan tertulis.

Rawatan dan penilaian

EPOCH diberikan selama 6 kitaran sepanjang hari 1 hingga hari ke 5 sebagai infus berterusan 96 jam etoposida, doxorubicin, dan vincristine (tanpa topi), dan prednison oral dengan siklofosfamid pada hari ke-5 seperti yang dinyatakan dalam Jadual 1. Untuk mengurangkan kejadian ketoksikan hematologi, dos cyclophosphamide pada kitaran 1 adalah berdasarkan nombor CD4 + sel pesakit pada kemasukan kajian (Jadual 1). Selepas itu, siklofosfamid diselaraskan naik atau turun dengan kenaikan 187 mg / m 2 (dos maksimum 750 mg / m 2) untuk mencapai nadir neutrofil mutlak kira-kira 500 sel / mm 3. Vincristine dikurangkan untuk ketoksikan seperti yang dijelaskan sebelumnya. 6,8 Tiada pesakit menerima rawatan antiretroviral semasa DA-EPOCH. Rawatan antiretroviral telah dimulakan sejurus selepas kitaran DA-EPOCH yang terakhir dan mematuhi piawaian penjagaan.

EPOCH yang disesuaikan dengan dos

Dadah. Dos. Laluan. Hari rawatan.
Ejen yang disuntik *
Etoposida 50 mg/m 2/hari CIV 1,2,3,4 (96 jam)
Doxorubicin 10 mg / m 2 / hari CIV 1,2,3,4 (96 jam)
Vincristine† 0.4 mg / m 2 / hari CIV 1,2,3,4 (96 jam)
Ejen bolus
Cyclophosphamide (kitaran 1)
Sel CD4 + ≥ 100 / mm 3 375 mg / m 2 / hari IV 5
Sel CD4 + & lt 100 / mm 3 187 mg/m 2/hari IV 5
Penyesuaian dos siklofosfamid (selepas kitaran 1) ‡
nadir ANC & gt 500 / μL ↑ 187 mg melebihi kitaran sebelumnya
nadir ANC < 500/μL atau platelet < 25 000/μL ↓ 187 mg di bawah kitaran sebelumnya
Prednisone 60 mg / m 2 / hari PO 1,2,3,4,5
Filgrastim 5 μg / kg / hari SC 6 → ANC > 5000/μL (melepasi nadir)
Kitaran seterusnya§ Hari ke 21
Dadah. dos . Laluan . Hari rawatan.
Ejen yang disuntik *
Etoposida 50 mg / m 2 / hari CIV 1,2,3,4 (96 jam)
Doxorubicin 10 mg / m 2 / hari CIV 1,2,3,4 (96 jam)
Vincristine † 0.4 mg / m 2 / hari CIV 1,2,3,4 (96 jam)
Ejen bolus
Cyclophosphamide (kitaran 1)
Sel CD4 + ≥ 100 / mm 3 375 mg/m 2/hari IV 5
CD4 + sel < 100/mm 3 187 mg / m 2 / hari IV 5
Penyesuaian dos siklofosfamid (selepas kitaran 1) ‡
nadir ANC & gt 500 / μL ↑ 187 mg melebihi kitaran sebelumnya
nadir ANC < 500/μL atau platelet < 25 000/μL ↓ 187 mg di bawah kitaran sebelumnya
Prednisone 60 mg / m 2 / hari PO 1,2,3,4,5
Filgrastim 5 μg/kg/hari SC 6 → ANC & gt 5000 / μL (masa lalu nadir)
Kitaran seterusnya§ Hari ke 21

Data adalah untuk kitaran 1, kecuali jika dicatat dalam "Penyesuaian dos siklofosfamid." - mewakili tidak berkenaan.

Etoposide, doxorubicin, dan vincristine boleh dicampur dalam larutan yang sama. Etoposida, doxorubicin, dan vincristine tidak pernah disesuaikan dos untuk ketoksikan hematologi.

Dos Vincristine tidak boleh dibatasi secara rutin.

Dos berdasarkan kitaran sebelumnya kiraan neutrofil mutlak (ANC) nadir (CBC BIW) dos maksimum siklofosfamid 750 mg/m 2 .

Mulakan hari ke-21 jika ANC ≥ 1000/μL dan platelet ≥ 50 000/μL.

Dalam kajian ini, kami berminat untuk menilai kesan interleukin 12 (IL-12) terhadap pemulihan imuniti dan kawalan limfoma. IL-12 telah terbukti mempromosikan subtipe fungsional TH-1 sel CD4 +, yang berkurang secara signifikan pada pesakit yang dijangkiti HIV. 20,21 In vitro, IL-12 memulihkan beberapa fungsi imunologi tertekan yang berkaitan dengan HIV, menunjukkan bahawa pengeluaran IL-12 yang cacat dapat memainkan peranan patogen dalam imunodefisiensi jangkitan HIV. 22 IL-12 juga menunjukkan kesan antitumor yang signifikan dalam sistem model murine yang bergantung pada sel T sitotoksik CD8. 23 Untuk menilai kesan klinikal IL-12, 20 pesakit berturut-turut yang mencapai tindak balas lengkap secara rawak untuk menerima 300 ng/kg IL-12 dua kali seminggu melalui suntikan subkutaneus selama 3 bulan atau tiada terapi lanjut. Sampel darah perifer diperoleh secara bersiri untuk menilai fungsi imun. Pengacakan ini mempunyai daya 80% dan 2 sisi α = .05 untuk mengesan perbezaan sisihan piawai 1.3 dalam nisbah min Th-1 / Th-2 antara 2 lengan.

Profilaksis sistem saraf pusat untuk limfoma, yang diberikan kepada 17 pesakit terakhir, ialah 12 mg methotrexate intratekal pada hari 1 dan hari 5 kitaran 3 hingga 6. Pesakit dengan limfoma sistem saraf pusat aktif menerima rawatan mengikut paradigma berikut: rawatan— intratekal atau methotrexate intraventricular atau methotrexate/cytarabine/prednisone dua kali seminggu selama 2 minggu melebihi sitologi negatif dan sitometri aliran, untuk penyatuan minimum 4 minggu—sekali seminggu selama 6 minggu penyelenggaraan—sekali setiap bulan selama 6 bulan. Pesakit tanpa tindak balas terhadap agen tunggal methotrexate menerima cytarabine. Radiasi kranial digunakan seperti yang ditunjukkan secara klinikal dalam kegagalan kemoterapi. Tidak ada pesakit yang menerima radiasi ke laman web lain. Pneumocystis profilaksis radang paru-paru diberikan semasa DA-EPOCH dan menghentikan rawatan pasca rawatan sekiranya sel CD4 + melebihi 200 / mm 3. Mycobacterium avium profilaksis kompleks diberikan kepada pesakit dengan sel CD4 + kurang daripada 100/mm 3 dan dihentikan selepas DA-EPOCH pada pemulihan.

Penilaian awal merangkumi ujian darah rutin, pencitraan otak dan badan, biopsi sumsum tulang, dan tusukan lumbal. Penilaian dilakukan selepas kitaran 4 dan 6, dan setelah menjalani rawatan. Tindak balas tumor adalah mengikut kriteria Bengkel Antarabangsa. 24 Respons lengkap dan respons lengkap titik akhir yang belum disahkan telah digabungkan.

Analisis molekul dan imunohistokimia

Analisis imunohistokimia tumor dilakukan pada tisu tertanam parafin dengan menggunakan antibodi terhadap CD20, CD10, MIB-1, bcl-2, bcl-6, p53 (Dako, Carpenteria, CA), dan MUM-1 / IRF-4 (hadiah dari B. Falini). Virus Epstein-Barr (EBV) dikesan oleh hibridisasi in situ terhadap EBER-1 pada sel-sel tumor. Semua analisis imunohistokimia dilakukan di Makmal Patologi, Institut Kanser Kebangsaan, dan dijaringkan seperti yang diterangkan sebelum ini oleh penyiasat yang sama (S. P.). 17

Selepas deparaffinization, slaid dihantar ke prosedur pengambilan antigen (dalam 10 mM sitrat buffer, pH 6.0, dalam periuk tekanan gelombang mikro dan gelombang mikro selama 40 minit pada 700 W) dan imunohistokimia kemudian dilakukan pada imunostainer automatik (Sistem Perubatan Ventana, Tucson , AZ) mengikut arahan pengeluar. p53 dianggap positif jika lebih daripada 10% sel tumor mempunyai pewarnaan nuklear. Slaid kawalan dijalankan bersama-sama dengan kes untuk mengesahkan kecukupan pewarnaan. Untuk bcl-2, intensiti pewarnaan dibandingkan dengan sel T kawalan yang terdapat pada sampel tumor. Sekiranya yang terakhir tidak bernoda, kes itu dinilai tidak memuaskan. Pewarnaan untuk bcl-2 dinilai sebagai berikut: 0, sel tumor negatif, tetapi sel T reaktif yang diselingi positif 1, sel tumor berwarna lebih ringan daripada sel T 2, sel tumor berwarna sama dengan sel T 3, sel tumor berwarna lebih kuat daripada T sel. Sel tumor dianggap positif untuk bcl-2 jika mereka mendapat markah lebih daripada atau sama dengan 1. MUM-1 dianggap positif jika terdapat lebih 20% pewarnaan nuklear sel neoplastik. Pewarnaan 17 MIB-1 dijaringkan sebagai persentil min 200 sel tumor rata-rata lebih dari 3 medan daya tinggi (hpf 40 ×), atau dalam kes dengan jumlah tisu seminit sebagai persentil rata-rata semua sel neoplastik dan dilaporkan 0% hingga 100%.

Analisis virus dan imun

Beban virus mRNA HIV-1 plasma diperoleh secara bersiri, termasuk hari 1 dan hari ke-6 setiap kitaran dalam 8 pesakit pertama. Beban virus diukur pada mulanya dengan penguatan berdasarkan urutan asid nukleik (NASBA), dan kemudian dengan kaedah Roche-Amplicor. 25 Kedua-dua kaedah mempunyai kepekaan dan julat dinamik yang serupa. Genotip transkripase terbalik HIV-1 dilakukan secara bersiri pada 9 pesakit seperti yang dijelaskan sebelumnya. 26

Subset T-limfosit ditentukan secara bersiri oleh sitometri aliran.Dalam 8 pesakit, CD4 + CD45RO + (komited) dan CD4 + CD45RA + CD62L (naif) CD4 + subset diukur secara bersiri. Bagi pesakit di bahagian IL-12 kajian, sel mononuklear darah diperoleh pada awal, kali bulanan 3, dan 6 hingga 12 bulan selepas DA-EPOCH untuk fitokemaglutinin (PHA) - pengeluaran sitokin yang dirangsang, termasuk interferon gamma (Biosource International, Camarillo, CA) dan interleukin 10 (Pierce Endogen, Rockford, IL), menggunakan kit ujian imunosorben berkait enzim komersial.

Analisis statistik

Kebarangkalian kelangsungan hidup keseluruhan dan kelangsungan hidup tanpa perkembangan dikira menggunakan kaedah Kaplan-Meier bermula dari tarikh kajian sehingga kematian, perkembangan akibat limfoma, atau susulan terakhir, mengikut kesesuaian. 27 Pesakit disensor untuk kelangsungan hidup tanpa perkembangan limfoma jika mereka mengalami keganasan kedua atau mati tanpa limfoma. Selain itu, semua kematian dianggap gagal, tanpa mengira sebabnya. Kemandirian bebas penyakit dikira dari tarikh kajian sehingga perkembangan atau susulan terakhir untuk pesakit yang mencapai remisi lengkap penyakit. Kepentingan perbezaan antara pasangan lengkung Kaplan-Meier dikira menggunakan prosedur Mantel-Haenszel. 28

Kelangsungan hidup bebas pesakit dengan tumor bcl-2-negatif dalam kajian ini dibandingkan dengan pesakit dengan tumor bcl-2-negatif dari kajian Institut Kanser Nasional DA-EPOCH pada pesakit HIV-negatif dengan DLBCL. 8 Perbandingan taburan ciri-ciri antara pesakit pada kajian ini dan mereka pada percubaan DA-EPOCH sebelumnya telah dilakukan dengan sama ada ujian tepat Fisher atau ujian khi kuasa dua mengikut kesesuaian, dan hasilnya dibentangkan tanpa pelarasan untuk pelbagai perbandingan. .

Model bahaya berkadar Cox digunakan untuk mengenal pasti pengaruh faktor prognostik pretreatment terhadap hasil dan termasuk limfoma sistem saraf pusat, usia, tahap, status prestasi Kumpulan Koperasi Onkologi Timur (ECOG), jumlah laman ekstranodal, dehidrogenase laktat (LDH), antarabangsa skor indeks prognostik (IPI), dan kiraan CD4 +. 29 Hanya faktor-faktor yang dikaitkan dengan signifikansi statistik marginal atau lebih baik (iaitu, dengan tidak disesuaikan P nilai & lt .05) akhirnya dinilai dalam model Cox. Memandangkan bilangan pesakit yang terhad dalam kajian ini, model Cox dan yang berkaitan P nilai-nilai dimaksudkan untuk ditafsirkan sebagai hipotesis menjana dan menunjukkan besarnya bukannya mutlak. Semua P nilai adalah 2-tailed dan dilambangkan sebagai P2.


Rakaman menghantui menunjukkan isteri cuba melawan suami samseng sebelum dia membuangnya keluar dari tingkap tingkat empat

Rakaman menghantui INI menunjukkan seorang isteri berusaha keras untuk melawan suaminya yang samseng sebelum dia mencekiknya hingga mati dan menghempaskan tubuhnya ke luar tingkap.

Peguam Tatiane Spitzner didakwa diserang dengan kejam oleh suaminya di sebuah lif sebelum dicekik kemudian dilemparkan dari sebuah apartmen tingkat empat di Brazil.

Polis telah mengeluarkan rakaman detik-detik terakhirnya di mana dia mengalami tahap pencerobohan yang mengejutkan oleh Luis Felipe Manvailer.

Khamis lalu, penyiasat forensik mengeluarkan laporan mereka yang menyimpulkan bahawa peguam itu tidak mati kerana jatuh tetapi dicekik ketika berada di apartmen pasangan itu.

Mayat mangsa yang berdarah dan pecah berusia 29 tahun ditemui di dalam pangsapuri pasangan itu di Guarapuava, Brazil selatan, pada 22 Julai.

Polis mengesyaki pensyarah biologi universiti berusia 32 tahun itu telah membunuh isterinya selama lima tahun selepas menyerangnya dengan kejam, tetapi dia mendakwa mereka bertengkar, dan dia meninggal dunia selepas mencampakkan dirinya dari balkoni di flat mereka.

Hasil kajian mereka menunjukkan bahawa Tatiane menemui jalan keluar yang ganas dan mati lemas ketika berusaha mati-matian untuk mempertahankan dirinya. Kesan sepasang tangan berada di kerongkongnya, dan tulang hyoid, yang terletak di bahagian depan leher, patah pada luka yang biasanya terkait dengan pencekikan.

Peguam itu juga mengalami beberapa keretakan di seluruh badannya konsisten dengan terjatuh 40 kaki ke atas turapan konkrit. Menurut laporan itu, tidak ada 'bukti reaksi kimia' seperti jejak adrenalin dan kortisol di tubuhnya yang akan menunjukkan ketakutan dan kesedaran terjun ke tanah.

Dia sudah mati pada saat dia jatuh ke tanah, kata para penyelidik.

Ujian juga menunjukkan paras alkohol darah yang ketara dalam darah mangsa 'yang menunjukkan dia agak terdedah', kata pakar forensik.

Gambar CCTV yang dirakam di tempat letak kereta bawah tanah dan lif menunjukkan bahawa dia berulang kali cuba melarikan diri. Kira-kira 20 minit setelah memasuki flat mereka, suspek didaftarkan membawa mayat mangsa yang tidak bernyawa ke dalam lif dan nampaknya membersihkan kesan darah dari dinding.

“Siasatan kami membuktikan mangsa dibunuh di dalam apartmen akibat sesak nafas dan mayatnya dicampak ke atas balkoni pangsapuri.

"Kami percaya tertuduh kemudian menaiki lif ke tingkat bawah dan mengumpulkan mayat Tatiane, membawanya kembali ke apartmen di lif," kata pendakwa jenayah Dunia Rampazzo.

"Kami mengesyaki bahawa sebelum dia dibunuh, Luis menundukkan isterinya untuk sekian lama serangan fizikal yang ganas. Ini bukan bunuh diri, tetapi femicide (pembunuhan seorang wanita oleh seorang lelaki kerana jantinanya). Penyerang kemudian cuba melarikan diri dengan kereta. "

Penduduk di bangunan itu, yang memanggil polis setelah mendengar seorang wanita menjerit meminta tolong, melaporkan melihat seorang lelaki mengambil mayat mangsa dari trotoar. Seorang saksi menceritakan mendengar dia menjerit "sayangku, bangun."

Polis mendakwa Manvailer mengaku membawa mayat ke dalam lif ke flat. Gambar keselamatan menunjukkan dia kemudian melarikan diri dari tempat kejadian dengan sebuah kereta.

Dia ditahan kerana disyaki membunuh kira-kira 185 batu (300km) dari bandar selepas terbabas di lebuh raya dan mendakwa dia melarikan diri kerana 'terlalu terganggu' dengan 'imej isterinya melompat' untuk tinggal.

Hasil bedah siasat dilakukan hampir dua bulan selepas kejadian jenayah ngeri itu berlaku.

Pada masa itu, kematiannya menimbulkan kemarahan nasional dan menimbulkan perdebatan di seluruh negara mengenai penderaan rumah tangga dan kerentanan wanita di negara di mana 1,133 menjadi mangsa pembunuhan pada tahun 2017. Menurut Forum Brazil mengenai Keselamatan Awam, tahun lalu, rata-rata daripada 530 wanita dilaporkan mengalami keganasan rumah tangga setiap hari.

Pakar forensik menjelaskan siasatan jenayah memakan masa lebih lama daripada jangkaan 30 hari kerana ini adalah kes yang rumit. Tiga simulasi yang meneliti dinamika kejatuhan pengacara dilakukan dari flat tingkat empat tempat pasangan itu tinggal.

Operasi itu menggunakan anak patung yang sama berat dan ketinggian mangsa yang dijatuhkan dari sudut berbeza menguji pelbagai kemungkinan bagaimana kejatuhan itu berlaku.

Rakaman yang menyedihkan mengenai adegan yang mengarah ke kematian pengacara memberikan gambaran mendalam mengenai penderaan rumah tangga yang dideritanya.

Rakan-rakan rapat mangsa mendakwa dia mendedahkan dalam beberapa teks, yang dikirim beberapa bulan sebelum kematiannya, bahawa dia 'takut' kepada suaminya yang dia menuduh 'menganiaya' dia, dan dia mahu perceraian.

Bagaimanapun, peguam bela kepada suami berhujah pasangan itu mempunyai hubungan yang ‘bahagia’.

Menurut laporan, pasangan itu keluar malam ketika mereka mula berdebat mengenai gambar seorang wanita yang dijumpai di telefon Manvailer.

Kamera keselamatan di kondominium pusat bandar tempat mereka tinggal, mendokumentasikan laporan mengenai kejadian yang bermula dengan sebuah kereta yang berhenti di luar bangunan.

Imej yang mengejutkan menunjukkan pakar seni mempertahankan diri Jiu-jitsu itu nampaknya menampar isterinya beberapa kali pada muka di dalam kenderaan ketika dia cuba melawannya.

Keganasan yang memalukan terus berlanjutan di tempat letak kereta bawah tanah dengan mangsa diserang, ditendang, dihempas, dikejar melintasi tempat letak kereta bawah tanah dan menuju ke lif di mana dia dipukul, dikuasai dengan kuat dan menahan diri ketika dia berusaha keras untuk melarikan diri.

Yang tidak dapat dilihat ialah 15 minit dakwaan kekejaman di dalam pangsapuri pasangan itu. Tetapi sejurus selepas pasangan itu tiba di apartmen mereka, satu mayat menjunam ke lantai di luar bangunan. Kamera menunjukkan tertuduh yang didakwa membawa mayat mangsa ke dalam lif.

Suspek memegang kepalanya dalam keadaan putus asa. Dia kemudian dilihat didakwa membersihkan kesan darah dari dinding lif.


Tonton video: Вся правда про віруси та самий правильний захист (Februari 2023).